GST,全称为glutathione-S-transferase,即为谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,可以与谷胱甘肽(glutathione,GSH)结合,其与CoIP实验都是验证蛋白互作的有效方法。 1、GST pull-down和与CoIP的区别 GST pull-down一般用于…
为了确定AIB1是否可以直接与NICD结合,将大肠杆菌产生的GST-NICD蛋白与基于大肠杆菌提取物的无细胞蛋白质合成系统产生的AIB1蛋白孵育,进行GST pull down检测是否直接互作。 结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GST,能够下调AIB1(图C),表明AIB1可以直接与NICD结合。为了确定AIB1的哪些结构域可以与NICD结合,在293T细胞中表达...
GST pull down+GST IB组:表示GST pull down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 6、...
GST pull down+GST IB组:表示GST pull down实验后用GST进行免疫印迹。发现三组均有条带,表明GST pull down实验体系可以正常发挥功能,也表明各组体系中含有GST相关的组分。 Input + YFP IB组:表示不经过GST pull down实验,直接对实验前各组的混合体系用YFP进行免疫印迹,是阳性对照组表明各组有YFP相关组分。 6、...
影响GST pull down实验结果的因素 1、 载体选择 对于不同的实验需要构建的载体是不同的，载体的选择对融合蛋白有很大的影响，需要综合考虑表达融合蛋白的可溶性、能否被 IPTG 诱导表达、以及是否能够高质量表达。目前，经改造的pGEX 载体由于同时具备以上优点而广泛应用于构建 GST 融合蛋白。2、 诱导温度 不同温度下...
gst-pull down鉴定蛋白纯化结果 GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,可验证已知蛋白之间的互作,也可用于筛选与已知蛋白互作的未知蛋白。其鉴定蛋白纯化结果的原理如下: -利用DNA重组技术将已知蛋白与GST融合; -融合蛋白通过GST与固化在载体上的GTH(谷胱甘肽)亲和结合; -将纯化的融合...
综合而言,GST pull-down实验和CoIP实验其实是相互补充的两种实验方法,通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 对于很多文献中CoIP和GST pull-down实验结果图,许多刚踏入科研领域的小伙伴可能不是很熟悉,看不大明白。今天咱们就...
gstpulldown质谱分析结果，看哪个参数 在生物研究中，GST pull-down实验是一种常用的筛选和鉴定蛋白质间相互作用的技术。通过此项实验，我们可以将目标蛋白质与它可能的互作伙伴隔离，并进行进一步的分析，例如使用质谱技术进行蛋白质质谱鉴定。在解读GST pull-down质谱分析结果时，有几个重要的参数需要关注。一、谱图...
综合而言, gst pull-down实验和coip实验其实是相互补充的两种实验方法,通过二者结合,我们才能更准确地了解两个蛋白之间的真实互作情况。 对于很多文献中 coip和 gst pull-down实验结果图,许多刚踏入科研领域的小伙伴可能不是很熟悉,看不大明白。今天咱...
在这次实验中，通过GST pull down技术，可以有效地验证GST-Atrogin-1-wt和β-catenin之间的相互作用。具体来说，实验包括两部分，首先是通过考马斯亮蓝染色观察GST bead与GST蛋白或GST-Atrogin-1-wt的孵育效果，以及在孵育后的bead中拉取β-catenin。然后是免疫印迹技术，将相同胶上的蛋白通过转膜转移到...