GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设...
然后通过蛋白印迹(westernblot,WB)技术分别使用诱饵蛋白抗体和目的蛋白抗体对沉淀中的蛋白质进行检测,若能够检测到沉淀中同时存在诱饵蛋白和目的蛋白,则说明这两种蛋白之间存在相互作用。 图1 Co-IP 原理示意图 GST pull-down: GST,全称glutathione-S-transferase,即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,能够和谷胱甘肽(Glutathione,GSH...
GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白，洗脱结合物后通过western blot分析，即可证实两...
GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两种蛋白...
▲ GST-pull down技术原理示意图 原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结...
GST Pull-down 实验流程: 1蛋白样品的制备 2体系孵育 3 GST Pull-down 4 洗涤 5 洗脱 6 WB检测或其他方式检测 三 实验结果解析 Co-IP 文献案例 图3 验证蛋白 NLRP3 与蛋白 GSN 之间是否存在互作的结果图。实验中 NLRP3 蛋白带有 FLAG 标签,GSN 蛋白带有 Myc 标签。
GST pull-downGST pull-down是验证两个蛋白体外结合的方法之一。原理是:将靶蛋白与GST融合表达,并将蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过WB分析,从而证实两种蛋白间的相互作用。 "...
超声23s停23s, 1520次一个循环,重新混匀,冰探头,至菌液清亮为止, 12000rpm, 离心 2mins, 取上清作样品,取部分作 In put, 剩下的作 GST Pull down2、根据定量结果取 X-GST-b 7、eads 加入到 IP buffer 平衡, 4C 旋转 23mins后 4C 3000rpm/600 g 5mins 离心,吸弃上清,重复 3 次。然后将平衡后 ...
使用Magarose-GSH磁珠进行 GST Pull-down 实验,操作简单、快捷,具有传统方法无可比拟的优势。 二、产品特性 产品名称 Magarose-GSH 货号 PMAG002 磁珠浓度 25%(v/v)in 20%乙醇 配基及密度 20-30 umol GSH/ml磁珠 介质 6%交联磁性琼脂糖 粒径 20-45μm 配体结合 6-10 mg GST融合蛋白/ml磁珠 保存 2~...
GST pull down验证两种已知蛋白质的相互作用 2免疫共沉淀 图2免疫共沉淀(co-IP)示意图 (1)原理 1)当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体...