GST pull down实验-如期生物 实验介绍:GST pull down实验叫做蛋白质体外结合实验,是体外验证/寻找互作蛋白的技术,在体外条件下检测蛋白质与蛋白质之间相互作用的方法。通过SDS-page电泳分析,或结合WB和MS检测,可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白,因此适用范围广。 主要应用 1、验证两个已知蛋白的相互作用...
然后通过蛋白印迹(westernblot,WB)技术分别使用诱饵蛋白抗体和目的蛋白抗体对沉淀中的蛋白质进行检测,若能够检测到沉淀中同时存在诱饵蛋白和目的蛋白,则说明这两种蛋白之间存在相互作用。 图1 Co-IP 原理示意图 GST pull-down: GST,全称glutathione-S-transferase,即谷胱甘肽-S-转移酶蛋白,能够和谷胱甘肽(Glutathione,GSH...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设...
▲ GST下拉实验（GST-pull down）技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与...
GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过western blot分析,即可证实两种蛋白...
GST Pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”。作用蛋白溶液过柱后，可从中捕获与之相互作用的“猎物蛋白”（目的蛋白），通过SDS-PAGE电泳结合Western Blot分析洗脱结合物，从而证实蛋白间的相互作用。如果互作蛋白未知，可将洗脱...
拉下实验（Pull-down）的缺点 1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证，例如Co-IP等；2、验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反映细胞内蛋白真实互作的状态；3、融合表达的GST标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白的原有的折叠结构。实验信息 实验过程中...
GST pull down原理示意图 利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。 客户提供 1、若是验证两种蛋白质间相互作用,需提供诱饵蛋白质及捕获蛋白质...
GST pull-down是两种蛋白在试管内(细胞以外)发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可,验证蛋白之间直接的相互作用。 Co-IP实验是细胞内高表达目的蛋白,并通过IgG球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。
图3 GST-pull down技术 二、GST标签蛋白的纯化[3] 谷胱甘肽亲和是一种高效的方法,可以一步纯化GST标签蛋白。无论是大肠杆菌或者其他宿主细胞中,天然表达的还是重组表达的,各种来源的GST标签蛋白,都可以用固定的谷胱甘肽亲和层析方法纯化,然后用过量的还原性谷胱甘肽竞争洗脱。