在Dox 诱导的系统中,GFP-GSDMD-NT 的表达通常会导致细胞膜点状分布,表明 GSDMD-NT 的寡聚化(图 3h、i、4k 和 5h);APT2 的敲除会强烈抑制这种效应,但不会影响 GSDMD-NT 的膜定位(图 5h),这表明 APT2 可能会调控 GSDMD-NT 的寡聚化。作者认为,在棕榈酰化促进转位并插入质膜后,GSDMD-NT 会被 APT2 ...
CPP-W 而非 CPP-M 能有效抑制 GSDMD 的棕榈酰化,并因此抑制了表达 GSDMD-NT 的 Dox 诱导型 HAP1 细胞的死亡,其指标包括 GFP 表达和 PI 染色、LDH 释放和细胞还原电位。在接受 LPS/Nig 挑战的 mBMDMs、接受 LPS/Nig 挑战的 THP-1 细胞(图 3,I 至 M)以及表达 GSDMD-NT 的 iBMDMs中也检测到了类似的...
使用pcr的方法获取pcdna3.1(+)-mgsdmd-nt-megfp质粒(基因合成,通用生物(安徽)股份有限公司)中的mgsdmd-nt片段,随后将其构建到实验室已有的含有tre promoter的tet-on表达载体 ptripz-3 × flag-h2a-mcherry(基因合成,通用生物(安徽)股份有限公司) 上,命名为ptet-on-mgsdmd-nt。在加入dox后即可实现gsdmd-nt 的...
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Single cell suspensions were first gated using forward scatter/side scatter (FSC vs SSC) to exclude debris (Gate 1), then gated using Green-B to identify GFP+ cells (Gate 2). f, g, Gsdmd-deficient BMDMs reconstituted with Dox-inducible GFP–GSDMD-NT (WT or C192A) were incubated with ...
aGsdmddisruption did not affect phagocytosis ofC. albicansby macrophages. WT andGsdmd-/-BMDMs were incubated with GFP-expressingC. albicansfor 60 min at MOI 10. Shown are the representative images. Scale bars represent 10 µm.bQuantification of in vitro phagocytosis capacity of BMDMs. Phago...
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在 LPS 处理后,与输注 WT 血小板的小鼠相比,输注的 Tlr4-/- 血小板(GFP 阴性和 CD41 阳性细胞)相对于总血小板计数(CD41 阳性细胞)的更大百分比被保留和检测。与输注 WT 血小板相比,输注 Tlr4-/- 血小板后 NLRP3 炎性体形成和 caspase 1 的激活显着减弱(图 3e、f )。总之,作者的结果表明 S100A8/A9 ...
由于细胞 IL-10 蛋白水平无法通过稳态小肠中的细胞内 FACS 染色进行评估45,因此作者将 IL-10-GFP 报告小鼠与 GsdmdSICR 小鼠或 H2-Ab1ΔIEC 小鼠杂交。 然后,作者从所得后代的十二指肠中分离出 LPL:与相应的 WT 同窝小鼠相比,GsdmdSICR 小鼠和 H2-Ab1ΔIEC 小鼠中 CD4+IL-10-GFP+ 细胞的数量和百分比均显...
After 2 days’ infection, stably transfected cells were selected with GFP by flow-cytometric analysis. Single-cell sorting of transfected cells was performed using flow cytometry (MOFLO XDP). gRNA sequences are shown in Supplementary Table 1C. Transfection by electroporation of THP-1 cells Electro...