Learn more about pushing the limits of Golden Gate Assembly (50+ fragment assembly achievable with high efficiency and accuracy!)
Learn the steps involved in Golden Gate assembly and how to efficiently plan and simulate your experiment.
一、Goldengate Assembly原理 Goldengate Assembly是一种基于限制性内切酶的DNA片段拼接技术,其原理类似于常规的基于限制性内切酶的DNA拼接技术,如克隆和基因组编辑等。该技术利用了限制性内切酶切割DNA后的粘性末端以及DNA连接酶的连接功能,实现了DNA片段的无缝拼接。 具体来说,Goldengate Assembly利用两种不同的限制性内切...
后来我看了很多文献,发现除了Gibson Assembly之外,其实还有很多好用的质粒构建方法,与Gibson Assembly几乎同时出现的Golden Gate Assembly就是其中的一种,这两种方法都可用于无缝克隆。 Golden Gate Assembly是一种新型的酶切连接方法 [1, 2],与传统的酶切连接方法不同。传统的酶切连接方法采用标准的II型限制性内切酶...
Golden Gate Assembly是依赖于IIS限制酶和T4连接酶的克隆技术,可以高效、无痕的克隆组装DNA片段。 与传统酶切连接的过程类似,但Gibson Gate Assembly 使用的限制酶为IIS限制酶(如BsmBI、BsaI和BbsI),其识别位点与切割位点不同,切割位点会在识别位点外切割出4个碱基的粘性末端。之后使用连接酶完成连接反应,反应完成后...
图1. Golden Gate Assembly克隆原理示意图【1】 02 Gateway技术 Gateway技术最早在1990s年被发现应用,主要用于表达载体、RNAi干扰载体等载体的构建。其原理利用噬菌体的特性:即噬菌体DNA会定点整合到细菌宿主基因组上。科学家们研究发现,噬菌体和细菌内均含有重组位点attP和attB,能有效帮助噬菌体入侵宿主细胞,从而将噬菌...
NEBridge® Golden Gate Assembly 特性和用法 需要但不提供的材料 用户自备的插入片段 感受态细胞 其它转化试剂 优势和特性 Features 无缝克隆 – 组装后无额外碱基存在 单次反应即可按顺序组装多个片段 也可用于单个片段克隆 有效组装高 GC 区和重复区
golden gate assembly原理 Golden Gate Assembly: A Versatile DNA Assembly Method Golden Gate Assembly is a powerful and widely used DNA assembly method in molecular biology research. It allows for the construction of complex DNA molecules by seamlessly joining multiple DNA fragments together. This ...
The NEBridge Golden Gate Assembly Kit (BsmBI-v2) contains an optimized mix of BsmBI-v2 and T4 DNA Ligase. BsmBI-v2 has been engineered by NEB and outperforms BsmBI in Golden Gate Assemblies. Together these enzymes can direct the assembly of multiple inserts/modules and also single insert/...
IIS型限制性内切酶切割DNA产生的粘性末端通常为2个碱基或4个碱基。在连接反应中，粘性末端的碱基数越多，连接产物的保真度越高，因此Golden Gate Assembly通常采用能够产生4碱基粘性末端的IIS限制酶，常用的有BsaI、BsmBI和BbsI 。三种IIS型限制性内切酶的特异性可分别记为：BsaI (GGTCTC 1/5),BsmBI (CGTCTC 1/...