gfp-lc3单荧光实验方法 GFP-LC3(绿色荧光蛋白-LC3)单荧光实验方法用于研究细胞自噬过程,以下是一种常用的实验方法: 材料: 1. GFP-LC3表达质粒 2.哺乳动物细胞系(如HEK293细胞) 3. PBS缓冲液 4. HEPES缓冲液 5.离心管 6.细胞培养培养基 7.离心机 8.荧光显微镜 步骤: 1.将GFP-LC3表达质粒转染至哺乳动物...
mcherry-gfp-lc3原理 Mcherry-GFP-LC3是一种荧光标记蛋白,用于研究细胞自噬。原理如下: 1. Mcherry是一种红色荧光蛋白,GFP是一种绿色荧光蛋白,它们都可以通过荧光显微镜观察。 2. LC3是一种微管相关蛋白3(Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3),参与调控和介导细胞自噬过程。LC3有LC3-I和LC3-II...
LC3-GFP质粒的构建通常是将LC3基因与GFP基因连接在一起,然后将其插入到适当的载体中,如质粒。具体步骤如下: 从细胞中提取LC3基因和GFP基因的DNA序列。 将LC3基因和GFP基因连接在一起,形成LC3-GFP融合基因。 将LC3-GFP融合基因插入到适当的载体中,如pEGFP-C1质粒。 将构建好的LC3-GFP质粒进行测序,确保序列正确无...
mrfp-gfp-lc3自噬评判标准 MRFp-GFP-LC3是一种用于评判细胞自噬活性的标识物。LC3(Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3)是自噬过程中的一个关键蛋白,其选择性地在自噬过程中结合于自噬囊泡膜上。MRFp-GFP-LC3是一种融合蛋白,将MRFp和GFP与LC3融合在一起,可以通过观察细胞内自噬囊泡膜上的MRFp-...
mRFP-GFP-LC3/CG双荧光小鼠: mRFP-GFP-LC3融合蛋白的病毒产品mRFP用于标记及追踪LC3,GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。 由于GFP荧光蛋白对酸性敏感(pH敏感),当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭,而mRFP相对稳定,因此只能检测到红色荧光。©...
gfp-lc3质粒转染细胞步骤 一、实验步骤: 实验步骤分为四个环节,依次是:接种细胞,准备gfp-lc3 DNA,脂质体复合物,共培养,检测转染效率。 1、接种细胞: (1 )细胞悬液浓度调整为1-2 x 105备用,取六孔板置于超净台面上,每孔接种细胞悬液2ml ,培养过夜。 (2 )观察细胞状态:细胞形态均一, 边界清晰,密度达到...
自噬双标腺病毒(mRFPGFPLC3)使用指南1404.pdf,. 自噬双标腺病毒〔mRFP-GFP-LC3〕使用指南 背景: 自噬是细胞内的一种 “自食〔Self-eating〕〞的现象,凋亡是 “自杀 〔Self-killing〕〞的现象,二者共用相同的刺激因素和调节蛋白,但 是诱发阈值和门槛不同,如何转换和协调
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载体中的LC3基因为大鼠的LC3B基因,是研究细胞自噬的重要标记物。 由强启动子CMV promoter(人巨细胞病毒启动子)驱动,确保外源基因的高效表达。 基于Invitrogen公司的pCDNA3.1(…
一.关于自噬及LC3 1. 自噬 大自噬(macroautophagy),也就是通常说的自噬(autophagy),是真核细胞蛋白降解的途径之一。自噬可以被描述为细胞质内的成分(细胞器、蛋白等)被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体(autophagosome),进而传递到溶酶体进行降解的过程。详细来说,自噬过程与内涵体途径(endolysosomal pathway)密不可分(...