gfp-lc3质粒转染细胞步骤 一、实验步骤: 实验步骤分为四个环节,依次是:接种细胞,准备gfp-lc3 DNA,脂质体复合物,共培养,检测转染效率。 1、接种细胞: (1 )细胞悬液浓度调整为1-2 x 105备用,取六孔板置于超净台面上,每孔接种细胞悬液2ml ,培养过夜。 (2 )观察细胞状态:细胞形态均一, 边界清晰,密度达到...
1.将GFP-LC3表达质粒转染至哺乳动物细胞系中。使用合适的转染试剂将GFP-LC3表达质粒引入细胞内,使细胞内表达GFP-LC3蛋白。 2.培养转染后的细胞系。将转染后的细胞系在培养基中按照常规方法进行培养,使其细胞生长并表达GFP-LC3。 3.处理细胞。根据实验需要,可以加入或处理细胞以诱导自噬过程。常用的方法包括处理细胞...
一、LC3-GFP质粒的构建方法 LC3-GFP质粒的构建通常是将LC3基因与GFP基因连接在一起,然后将其插入到适当的载体中,如质粒。具体步骤如下: 从细胞中提取LC3基因和GFP基因的DNA序列。 将LC3基因和GFP基因连接在一起,形成LC3-GFP融合基因。 将LC3-GFP融合基因插入到适当的载体中,如pEGFP-C1质粒。 将构建好的LC3-GFP...
自噬目的建立稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)的大鼠心肌细胞H9c2细胞系.方法构建MSCV-GFP-LC3表达载体,应用转染技术将该质粒导入H9c2细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.载体细胞与心肌细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与共聚焦显微镜及Western blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察应激时细胞发生...
你好,脂质体转染就可以,这个能给我点 3楼2019-01-17 09:11 回复 qqq6595291 生物分子 1 请问您能馈赠点mRFP-GFP-LC3质粒吗?我也实验需要,非常感谢! 4楼2019-04-13 21:18 回复 麋啊哇鹿 生物分子 1 你好 请问能惠赠一点质粒吗 8楼2019-10-22 14:44 回复 于娇891216 生物分子 1 请问您...
可以通过RFP-GFP-LC3双标腺病毒检测。GFP在酸性环境中降解，红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体。如吞噬体和溶酶体能正常融合，那么红色荧光多于黄色荧光，如自噬下游阻滞，吞噬体和溶酶体不能正常融合，则主要为黄色荧光。
一.关于自噬及LC3 1. 自噬 大自噬(macroautophagy),也就是通常说的自噬(autophagy),是真核细胞蛋白降解的途径之一。自噬可以被描述为细胞质内的成分(细胞器、蛋白等)被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体(autophagosome),进而传递到溶酶体进行降解的过程。详细来说,自噬过程与内涵体途径(endolysosomal pathway)密不可分(...
摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...
方法:构建pcDNA3.1-GFP-LC3真核表达载体,应用转染技术将该质粒导入RAW264.7细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系。真核细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Westernblot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况。结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察...
该质粒含有CMV启动子,为卡那霉素抗性,转染细胞后能够在靶细胞中高效表达绿色荧光蛋白GFP标签的LC3B的融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光,可以用于细胞自噬(autophagy)的研究。本质粒转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达融合蛋白的细胞株。 LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-...