加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
在正常细胞要分布在细胞膜内侧,在细胞发生凋亡的早期,细胞膜上的PS会外翻到细胞表面。用带有绿色荧光的 Annexinv-fitc标识出凋亡细胞。 艾美捷Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒还提供了碘化丙啶(PI),PI可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现紅色荧光,用 Annexin V-FITC和碘化丙啶染色...
1，必须活细胞检测，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。2，特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞(如神经元细胞)很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，...
图3. FITC和PI的发射光谱 调节方法:设置对照 空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节荧光通道的光电倍增管电压; 单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用...
图1：Annexin V 检测原理 02 实验结果展示 图2：Annexin V-FITC/PI（E-CK-A211）实验结果展示 03实验中需要注意的细节 a. 样本制备方面：（1）贴壁细胞要尽量使用不含EDTA的胰酶进行消化。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后，要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTA。（2）比较难消化的细胞、组织等样本，可以分...
b)了解FITC-AnnexinV/PI双染色法检测凋亡细胞的原理及方法。 二、实验原理 a)细胞凋亡是细胞内由多个基因控制的死亡程序被活化而导致的细胞自杀(cell suicide)。膜磷脂酰丝氨酸原来位于细胞膜的内部。在细胞凋亡早期,细胞膜上的膜磷脂酰丝氨酸外翻与AnnexinV结合,使其被染成绿色。在细胞凋亡晚期,细胞膜破裂,使得PI进...
因此,在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的二维散点图上,左下象限显示活细胞,为(FITC-/PI-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(FITC+/PI+);而右下象限为凋亡细胞,显现(FITC+/PI-)。 如上图是流式细胞术分析TRAIL诱导的Jurkat细胞凋亡,从图中可以看出...
流式细胞术检测细胞凋亡(AnnexinV-FITC/PI双染法) 一、原理 在正常的活细胞,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在凋亡的细胞,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。因...
Annexin V and PI 双染色流式法细胞凋亡检测试剂盒产品特点: ● 快速方便---检测试剂盒中提供已经标记好的Annexin V-FITC和即开即用型的碘化丙啶 (propidium iodide,PI)。 ● 荧光更亮---标记好的Annexin V-FITC中的FITC(fluorescein)是Molecular Probes公司专门 研发的Alexa FluorR 488 dye染料,该染料比普通...
目的激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V/PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡的形态.方法对不同剂量含药血清处理的体外培养人肺癌PGLH7细胞株进行Annexin V/PI双染,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡的形态特征.结果 AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察,经含药血清作用的人肺癌细胞中,凋亡早期细胞呈Annexin V高染而PI低...