加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
图3. FITC和PI的发射光谱 调节方法:设置对照 空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节荧光通道的光电倍增管电压; 单染管:分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管,用来调节2个荧光通道的补偿值; 荧光素之间的补偿值应保持恒定;双荧光染色时,如果一个荧光很强,而另一个很弱,则一定要做补偿;补偿只应用...
1,必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。2,特殊细胞的染色方法:在消化或吹打时,有些细胞(如神经元细胞)很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果。实验的解决方法:先低速离心,吸取细胞培养板中的液体,留少许液体,加入适量PI和Annexin-V染色10min后,...
流式细胞仪激发光波长用488nm,用一波长为515nm的通带滤器检测FITC荧光,另一波长大于560nm的滤器检测PI。 凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性,坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光,而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此,在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有...
Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒( Annexin V-FITC/ PI Apoptosis Detection Kit)是用FITC融合的重组人 Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸(PS)的一种细肥凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光微镜或其它荧光检测设备进行检测。
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● 清晰辨识---采用Annexin V-FITC/PI双染色的流式细胞检测试剂盒进行Annexin V细胞凋亡检测 ,可以获得清晰的、易辨别的实验结果:绿色荧光细胞群代表凋亡细胞;红色和绿色细胞群代表死细胞;无荧光或微弱荧光细胞群代表活细胞。 Annexin V and PI 双染色流式法细胞凋亡检测试剂盒产品组份: Part...
Annexin V&PI双染色法 Annexin V&PI双染色法 以BIODAI为例 Annexin V-FITC/PI凋亡双染试剂盒的特点:∙可选择FITC或EGFP 标记Annexin V;∙试剂盒配套核染料PI,可与Annexin V的绿色荧光配合区分早晚凋亡和坏死细胞;∙适用于流式细胞仪和荧光显微镜;∙荧光信号强,无细胞毒性,不易淬灭,稳定性...
流式细胞术检测细胞凋亡(AnnexinV-FITC/PI双染法) 一、原理 在正常的活细胞,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在凋亡的细胞,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。因...