未染色组：用于检测自然荧光。PI 单染组：用于确定 PI 的阳性阈值。Annexin V-FITC 单染组：用于确定 Annexin V 的阳性阈值。荧光显微镜检测 1. 离心后用少量 Binding Buffer 重悬细胞，涂片。2. 在荧光显微镜下观察，通常 Annexin V-FITC 发出绿色荧光，PI 发出红色荧光。3. 可以通过拍照或计数来定量分析凋亡
由于晚期凋亡和一些坏死的细胞也可以与Annexin V结合，因此需要引入另一种指标来将早期凋亡的细胞与之区分，这种指标就是细胞膜的通透性。与正常细胞和早期凋亡细胞不同，晚期凋亡及坏死细胞的膜通透性会增加，因此，一些原本不能进入到正常细胞内的核酸染料(如PI)便有机会进入细胞内与DNA结合。所以，通过Annexin V和PI...
活细胞:Annexin V-FITC⁻/PI⁻ 早期凋亡细胞:Annexin V-FITC⁺/PI⁻ 晚期凋亡或坏死细胞:Annexin V-FITC⁺/PI⁺ 机械损伤细胞:Annexin V-FITC⁻/PI⁺ 二、实验操作的核心步骤 样本准备 收集待测细胞(如药物处理的肿瘤细胞),离心后弃上清。 用预冷的PBS洗涤两次,避...
建议在实验开始阶段分析经Annexin V、PI分别单染的细胞来调整荧光补偿去除光谱重叠。根据未处理细胞空白对照和经Annexin V、PI分别细胞染色后的单染对照的分析设定十字门的位置;4 正常细胞:Annexin ⅴ-FITC (-);PI (-); 早期凋亡细胞:Annexin ⅴ-FITC (+);PI (-); 晚期凋亡细胞: Annexin ⅴ-FITC (+);PI ...
检测原理 Annexin V-FITC:在细胞凋亡的早期,PS从细胞膜内侧翻转到外侧。Annexin V是 一种与PS高亲和力结合的蛋白质,能够标记外翻的PS,从而检测早期凋亡细胞。 PI染色:PI是一种能够进入膜完整性已受损的细胞的染料。由于活细胞和早期凋亡 细胞的膜完整性较好,PI无法进入,因此这些细胞对PI是阴性的。
1、实验原理 流式fitc和pi四象限实验是基于细胞状况的荧光信号来进行分析,首先通过FITC和PI染色将细胞分类,然后在流式细胞仪中进行检测得到荧光信号。 2、步骤 (1)取相应数量的细胞,进行细胞处理,并用PBS冲洗一次去除培养基和残留药物等。 (2)将细胞溶解液均匀加入每个实验管中,加入FITC染液和PI染液,使细胞达到充...
01实验原理 Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期，只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）翻向外侧，用标记了荧光素的Annexin V作为荧光探针，并搭配PI、7-AAD、DAPI等核酸染料使用，能够准确区分正常细胞、凋亡早期和...
4. 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。 5. 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。 更多有关Elabscience Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒的检测原理与注意事项,请联系Elabscience试剂盒代理——上海金畔生物科技有限...
今天小编来继续给大家普及下流式细胞仪的实际运用,主要介绍运用流式细胞仪检测细胞凋亡方法之一Annexin V-FITC/PI双染色法,让童靴们更好的了解此细胞凋亡检测方法的基本原理,结果检测与分析。 分享按钮 基本原理 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从...