以HRP作为标记酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05% Tween20的中性PBS,其中,吐温20的浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低实验的灵敏度。 【显色】 目前以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中,如以TMB为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以OPD为底物,则试...
4. 对于灵敏度低的问题，可以采取以下措施：a. 优化抗体和抗原的结合条件，提高抗体与抗原的特异性和亲和力；b. 采用灵敏度更高的酶标仪和检测系统；c. 增加样本浓度和检测次数，以提高实验的灵敏度。四、结论ELISA实验中可能出现的问题多种多样，但通过规范实验操作流程、加强质量控制和采取相应的解决方案，可以有效...
一、ELISA板子划板现象：在ELISA实验中，经常会遇到板子划板的问题，这主要表现在包被酶标板的聚苯乙烯（PS）底板上出现弯曲或不规则划痕。原因：1. 酶标板在运输过程中受到剧烈震动。2. 酶标板叠放或摆放不平整。3. 包被不均匀。解决方案：1. 在运输过程中尽量减少震动，最好使用防震包装。2. 酶标板应平整叠放...
问题一：高背景或阴性对照值偏高 问题二：阳性对照值偏低或低吸光度 问题三：边缘效应 问题四：标准曲线不佳 问题五：标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号 问题六：重复性较差 问题七：假阳性反应 问题八：整块板产生阳性OD值或整个板显蓝色 问题九：整块板OD值偏低 问题十：显色缓慢 ...
在进行ELISA实验时,可能会遇到一些常见问题,下面我们一起来看看这些问题的原因和解决方法吧。 阴性对照出现阳性结果 📊 样品或试剂被污染:如果样品或试剂被污染,或者加样时操作不当导致溶液溅洒到相邻孔,可能会出现交叉污染。解决方法是更换试剂,并小心操作。 酶标板洗涤不彻底:洗板前要将抗体溶液倒干净,然后加入足够...
(一)ELISA实验常见问题及解决方法 ELISA实验常见问题1.检测无信号 (1)HRP受到污染 解决方法:使用新配制的试剂 (2)抗体用量不足 解决方法:增加抗体用量或浓度 (3)试剂添加有误 解决方法:重新进行实验 ELISA实验常见问题2.高背景信号 (1)洗板不充分 解决方法:增加洗涤次数;确保在洗涤前清除所有残留抗体溶液 ...
ELISA是分子生物学、免疫学和细胞生物学研究中常用到的实验操作之一,相信大家常常会有这样那样的实验问题。下面让我们一起来看看ELISA实验的常见问题都有哪些吧! 1. 洗板不干净 解决方法: ①充分洗涤:如果洗板的时间不够,会导致抗体残留,阴性对照会显色,尝试延长洗板时间,增加洗板频率,在洗液中添加表面活性剂Tween-20...
使用适合做ELISA的板,不能用细胞培养板 清洗不充分 每个微孔中应加入等体积清洗液,确保所有微孔均可被抽吸干净,并及时填充。 移液出错 校正移液器,快速、等量的将移液器中的试剂沿微孔的侧壁加入 显色时间过长 空白孔的O.D.读数不超过0.2或最高浓度标准品孔的O.D.读数不超过1.2。
6、在使用ELISA试剂盒时应注意:2-8℃保存(特殊情况除外)、同一品种不同批号试剂不能混用、不同品种试剂盒显色剂不能混用。 常见问题及分析 1、阳性对照不显色 漏加阳性对照 阳性对照孔忘加酶或忘加显色剂 阳性对照受污染 2、阳性对照显色浅(HBeAb HBcAb阴...
ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA) 即酶联免疫吸附实验,是目前广泛应用于各种抗原抗体检测的方法,主要有灵敏度高和特异性强的特点。ELISA操作步骤看似简单,整个测定过程中却有诸多影响因素,导致检测结果可能与实际结果偏差较大。最常出现的问题包括显色淡,灵敏度偏低、重复性不佳等。