以小麦开花后10天的小麦种子为实验对象提取蛋白，以CCRM1-1为探针并使用生物素标签进行标记，进行DNApull-down，捕获的蛋白进行SDS-PAGE分离，酶解后利用LC-MS对结合探针的蛋白进行鉴定。三、研究结果 通过LC-MS共鉴定出385个蛋白，其中包含118个可能与CCRM1-1结合的转录效应子，118个转录效应子中包含31个转录因子。
先将含脱硫生物素的DNA pulldown探针结合到链霉亲和素Beads上,再将DNA-Beads和细胞裂解液孵育,这样DNA结合蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将DNA结合蛋白从Beads洗脱下来,得到DNA pull down产物。DNA-protein复合物既可以用WesternBlot检测已知蛋白,也可以用质谱鉴定未知蛋白。 生物素和链霉...
DNA pull down实验技术原理-DNA pulldown详细实验流程 DNA pull down-MS 是研究体外 DNA-蛋白质相互作用的有力工具。 生物素标记的 DNA 片段与链霉亲和素磁珠结合，然后与细胞核蛋白一起孵育。 然后对蛋白产物进行纯化和洗脱，通过western-blot检测特异性蛋白是否与靶DNA片段结合； 质谱法用于鉴定可能与 DNA ...
Q6:DNA pull down有什么缺陷吗?A:DNA pull down-MS是体外研究蛋白-DNA是否有直接互作的经典技术,是将探针结合在凝胶/磁珠上,钓取与DNA探针有互作的蛋白;就技术而言,没有明显的缺陷;后续质谱能鉴定到多少蛋白取决于蛋白-DNA结合的强弱、蛋白的丰度等。Q7:做DNA pulldown 用DNA单链好还是双链好?A:常规的是用...
A：DNA pull down-MS是体外研究蛋白-DNA是否有直接互作的经典技术，是将探针结合在凝胶/磁珠上，钓取与DNA探针有互作的蛋白；就技术而言,没有明显的缺陷;后续质谱能鉴定到多少蛋白取决于蛋白-DNA结合的强弱、蛋白的丰度等。Q7： 做DNA pulldown 用DNA单链好还是双链好？A：常规的是用DNA双链作为探针。Q8： ...
DNA Pull Down原理: DNA pull down-MS是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,经洗脱纯化得到与DNA片段互作的蛋白蛋白产物,可通过下列两种方式检测: i:western-blot,检测特定某蛋白是否与靶DNA片段结合; ...
在前面的文章中我们和大家一起学习了RNA pull-down这种实验技术,好学且好奇心强的小编又很快发现一种和它挺像的叫做DNA pull-down的新技术,再一起来看看吧。 一、原理概述 DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可...
图 DNA Pull-down流程图 服务流程 服务流程 客户在线下单——订单/实验材料确认——样品处理——探针标记——蛋白与探针共孵育——Western blot或LC-MS/MS检测——结果交付 服务内容及说明 服务内容及说明 适用范围 1、验证已知DNA与蛋白的相互作用；2、筛选与已知DNA相互作用的未知蛋白。DNA Pull-down的优点 1、...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...