RNA Pull Down 是一种用于研究RNA与蛋白质之间相互作用的实验技术;质谱分析 (Mass Spectrometry, MS) 是一种可用于鉴定和分析复杂生物样品中的蛋白质质量和序列信息的高效、准确的生物分析技术。RNA Pull Down 质谱分析是结合了 RNA Pull Down 和质谱分析的技术,主要用于鉴定特定 RNA 分子与之相互作用的蛋白质。 1...
一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞)准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞，然后转移到离心管。通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞，并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。二、细胞裂解 1.解冻细胞颗粒。2.通过在4°C下...
图4 我司RNA Pull-down案例展示：（A）体外转录法电泳检测图（阳性），左图：PCR扩增DNA的电泳；右图：体外转录标记RNA的电泳；（B）RNA Pull-down的银染结果；（C）MS差异蛋白鉴定及KEGG分析。伯远医学拥有一流的技术团队、丰富的项目经验，提供专业RNA Pull-down技术服务，适用于RNA与蛋白结合的领域研究，欢迎大...
本次实验的目的是使用RNA-Pull down-MS或者RNA-Pull down-WB的方法,通过体外转录法标记生物素RNA探针,在目的细胞中通过目的探针把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析,寻找目的RNA的靶标蛋白,或在不同遗传背景或处理条件下的互作变化。 广州基云生物拥有资深的项目管理...
为了找到FOXD3-AS1的靶蛋白,研究者进行了RNA pull-down(图3C)和质谱(MS)分析鉴定(图3D),鉴定到潜在结合蛋白YBX1,RNA pulldown WB技术实验验证了FOXD3-AS1可以与YBX1结合(图E)。RNA免疫沉淀(RIP)qPCR实验操作再次确认了YBX1是FOXD3-AS1的靶蛋白(图F)。为了探讨FOXD3-AS1和YBX1的表达关系,在体外NPC细胞...
Q6:DNA pull down有什么缺陷吗?A:DNA pull down-MS是体外研究蛋白-DNA是否有直接互作的经典技术,是将探针结合在凝胶/磁珠上,钓取与DNA探针有互作的蛋白;就技术而言,没有明显的缺陷;后续质谱能鉴定到多少蛋白取决于蛋白-DNA结合的强弱、蛋白的丰度等。Q7:做DNA pulldown 用DNA单链好还是双链好?A:常规的是用...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。 通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
2.高效、通量大,一次性获得可能与目的 RNA 互作的蛋白。 3. ChIRP-WB/ChIRP-QPCR ChIRP-WB 用于 ChIRP-MS 筛选到的 RNA 互作蛋白验证,而 ChIRP-QPCR 用于 ChIRP-Seq筛选到的 RNA 互作核酸验证。 4. RNA pull-down_WB RNA pull down-WB用于 RNA pull down-MS 筛选到的 RNA 互作蛋白验证。
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
为了深入研究lnc-POP1-1影响HNSCC细胞顺铂耐药性的机制，研究者使用RNA pull-down和蛋白质谱分析(LC-MS/MS)来探索推定的与lnc-POP1-1相互作用的RNA结合蛋白。顺铂耐药的HN4/DDP和HN30/DDP细胞表现出比顺铂敏感的HN4和HN30细胞更低的γH2AX(一种DNA损伤标记物)表达。此外，HN4/DDP和HN30/DDP细胞显示出增强...