RNA-RNA pull-down是检测RNA与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA-RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆提取液孵育，形成RNA-RNA复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过qRT-PCR实RNA-RNA pull-down是检测RNA与其靶RNA之间相...
图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
1. RNA pull-down的原理 RNApull-down是研究细胞内RNA与蛋⽩/RNA结合情况的技术。先将RNA进⾏标记 (如⽣物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从⽽形成RNA-RNA/蛋⽩质复合物,进 ⽽检测与之结合的RNA或蛋⽩质。复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down- QPCR)或⾼通量测序(RNApull down-seq...
RNA pull-down RNA pull-down的主要目的是通过特定的RNA分子(通常是已知的非编码RNA或mRNA的片段)来富集与之相互作用的蛋白质,以便进一步研究这些相互作用的性质和功能。RNA pull-down的基本步骤如下:① RNA标记:首先,标记目标RNA分子(通常是合成的in vitro转录RNA),通常使用生物素(biotin)标记。这种标记的RNA片段可...
RNA-蛋白互作之RNA pull down RNA pull down-实验简介 RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后...
RNA-Pull down实验详细操作方法流程 RNA-Pull down实验详细操作方法步骤：一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞)准备细胞5E7细胞。用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞，然后转移到离心管。通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞，并丢弃上清液...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
RNA-RNA pull-down是检测RNA与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA-RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆提取液孵育,形成RNA-RNA复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过qRT-PCR实验检测特定的RNA是否与靶标RNA相互作用。 在RNA...
RNA-Pull down实验详细操作方法步骤: 一、细胞收集(对于单层细胞或贴壁细胞) 准备细胞5E7细胞。 用10 mL冰冷的PBS洗涤培养瓶或平板上的细胞两次。 加入10 mL冰冷的PBS。从每个培养瓶或平板上刮下细胞,然后转移到离心管。 通过在4°C下以1500 rpm离心5 min来收集细胞,并丢弃上清液。细胞沉淀-80℃保存。
RNA pull-down用于检测RNA-蛋白质、或RNA-RNA之间相互作用的技术,其基本原理是:利用带标签的目标RNA探针与待测蛋白质或RNA进行体外或体内结合,通过亲和作用将复合物分离出来,之后采用Western Blot、质谱技术检测结合蛋白,或采用qPCR、测序技术检测结合RNA。