(1)封闭:蛋白膜放置到TBST溶液中,漂洗1-2分钟,以洗去膜上的转膜液;加入5%脱脂奶粉封闭液,室温50rpm,封闭60分钟;(2)转膜:转膜为恒流转膜,电流为200mA,时间根据目的蛋白分子量选择60~120分钟;(3)电泳:实验采用不连续系统蛋白质SDS-PAGE,浓度为5%浓缩胶和8~12%浓度分离胶;每孔上样40~60ug总蛋白,开始电压为1...
1 Control Pull-down溶液 Ovis aries 2 sample Pull-down溶液 Ovis aries (2)检测过程 略 (3)检测结果 样品名称 Control sample 差异蛋白 Protein Group 230 327 132 7、生物信息学分析 针对实验组扣除对照组后的132个差异蛋白进行生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String)。 (1)GO分析 根据分类结果,对包含目...
DNA Pull down实验是一种用于研究DNA与蛋白质相互作用的体外实验方法，旨在从复杂的蛋白质混合物（如细胞裂解液）中捕获能够与特定DNA序列结合的蛋白质。通过该实验，可以研究DNA结合蛋白的种类及其调控功能，常用于研究转录因子、DNA修复蛋白等DNA结合蛋白。DNA Pull down 实验的基本步骤 1. DNA探针的设计和标记：设计...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...
DNA pull down是研究蛋白-DNA的互作,不可以用DNA互补链相互钓取。 实验可做代包、坐标南京、可接全国蛋白互作类实验,我们拥有丰富实验经验和高效工作能力,我们提供生物学、细胞生物学、植物学等领域的专业论文基金申请、写作辅导以及SCI论文润色服务。我们致力于以优惠的价格为您提供优质服务,助力您的研究工作加速前进。
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DNA pull down技术是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的分析方法。它通过体外实验来探究DNA与转录调控蛋白质的互作,最常见的应用是验证启动子与转录因子的互作情况。🔍 技术原理 将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,形成磁珠-DNA探针复合体。然后与细胞核蛋白孵育,这可以将与DNA结合的蛋白吸附在磁珠上。
8、将吸附柱CB2放入一个新的离心管中,向吸附膜中间位置滴加30μl洗脱缓冲液EB,室温放置2min,12,000rpm离心1min,收集DNA溶液。 5实验结果 l探针PCR扩增琼脂糖凝胶图 Marker:DL2000 PROBE:目的基因启动子区 二.DNA pull down实验 1实验目的:通过生物素标记的探针,在细胞中钓取与启动子区有相互作用的蛋白;并进...
本文以案例为基础,详细介绍了DNA pull down实验的流程,包括实验所需的仪器试剂、实验方法及实验结果,仅供参考。 试剂和耗材样品: 采用PCR制备探针 引物序列:F:5' CTATCCGGCCCAAGCTTT 3'R:5' AATAATTCACCTTGGTGTAAC 3'(728 bp) PCR反应体系如下: ...
DNA pull-down 是检测目标 DNA 序列与蛋白质之间相互作用的主要方法之一。钟鼎生物生产的 DNA PullDown Kit 利用链霉亲和素磁珠与生物素的强亲和力,高效调取生物素标记的目标 DNA 序列及其结合蛋白。 首先制备生物素标记的 DNA 探针,再与动物样本裂解液孵育,DNA 探针与样本中的蛋白质结合形成复合物;链霉亲和素磁珠...