Cas9 蛋白与人工设计的 sgRNA 结合成为 sgRNA-Cas9 蛋白复合体并在其引导之下结合到特定的核苷酸序列切割...
CRISPRi和CRISPRa均可通过针对不同的基因设计不同的sgRNA进行批量调控或实现同时激活/抑制某些功能相关的基因，是了解复杂基因网络功能的利器。汉恒专营工具病毒十余载，可提供CRISPRi/CRISPRa的相关质粒以及病毒工具，如有技术问题或产品订购需求，欢迎随时咨询！参考文献：[1] Dominguez AA, Lim WA, Qi LS. Beyond...
转录抑制(CRISPRi):通过将 dCas9 与序列特异性 sgRNA 配对,dCas9-sgRNA 复合物可以结合至转录起始位点(TSS)附近,通过物理性阻断 RNA 聚合酶 (Pol) 与靶标DNA结合来干扰靶标基因的转录延伸,还可以通过破坏转录因子的结合来阻碍转录起始,达到基因沉默或减少基因转录的效果。为了进一步提高转录抑制的效率,dCas9可融合...
(1)人工设计合成的一小段特异性RNA序列(single guide RNA,sgRNA)与dCas9和转录调控因子形成的融合蛋白组成复合体; (2)该复合体中的sgRNA的碱基互补配对序列与目标基因结合; (3)dCas9-sgRNA复合物作为一个支架将一系列效应分子募集到特定的位置来激活基因转录或因空间位阻阻止RNA聚合酶与启动子结合及抑制转录延伸,...
1设计sgRNA 按照“20N+NGG(PAM)”的设计原理设计sgRNA,至少设计3条。 2构建sgRNA和dCas9-target 质粒 3、构建dCas9-target稳转株 稳转株蛋白构建完成后,用flag抗体或目的蛋白抗体检测稳转株是否构建成功,如果载体上有荧光蛋白,可用荧光检测细胞株是否构建成功。
接下来利用网站在线设计sgRNA http://crispr.mit.edu 由于这个网站只能够输入250bp,而依据文献最优的在-50_-400bp左右,因此需要再向前找。(注:一般情况下sgRNA的最适结合位点需要通过实验摸索) 这是根据一个转录本得到的sgRNA, 需要检验一下根据这个转录本得到的sgRNA能不能cover住该基因所有的转录本 ...
接下来利用网站在线设计sgRNA http://crispr. 由于这个网站只能够输入250bp,而依据文献最优的在-50_-400bp左右,因此需要再向前找。(注:一般情况下sgRNA的最适结合位点需要通过实验摸索) 这是根据一个转录本得到的sgRNA, 需要检验一下根据这个转录本得到的sgRNA能不能cover住该基因所有的转录本 ...
(1)人工设计合成的一小段特异性RNA序列(single guide RNA,sgRNA)与dCas9和转录调控因子形成的融合蛋白组成复合体; (2)该复合体中的sgRNA的碱基互补配对序列与目标基因结合; (3)dCas9-sgRNA复合物作为一个支架将一系列效应分子募集到特定的位置来激活基因转录或因空间位阻阻止RNA聚合酶与启动子结合及抑制转录延伸,...
接下来利用网站在线设计sgRNA http://crispr.mit.edu 由于这个网站只能够输入250bp,而依据文献最优的在-50_-400bp左右,因此需要再向前找。(注:一般情况下sgRNA的最适结合位点需要通过实验摸索) 这是根据一个转录本得到的sgRNA, 需要检验一下根据这个转录本得到的sgRNA能不能cover住该基因所有的转录本 ...
Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier将crRNA和tracrRNA融合成一条RNA链条，并把其称为sgRNA (single-...