采用qPCR的方法来检测5ng的如上调整过分文库,以检测接头是否可以正确连接和文库是否可以扩增。 (26)(可选步骤)DNA扩增以去除甲基化并得到扩增的DAP文库。 2.DAP-seq 实验流程 (27)蛋白表达,在96孔PCR板内,根据说明书构建一个50μl体系的TNT(无细胞表达系统)表达反应,每个反应需要1μg pIX-Halo-ORF 质粒 DNA...
(2)样本重复:针对同一个转录因子可以不设置重复样本;如果想设置重复样本,建议两到三个,且一次性完成重复实验(3)分析信息准备:本研究物种匹配的成熟的基因组信息(包括基因组 fa 文件、gff 文件、pep.fa 文件)备注:理论上植物转录因子都可以做DAP-seq,非植物样本理论上可行,但由于DAP是植物的表达系统,无法保证后续...
蓝景科信DAP-seq(DNA亲和纯化测序)技术服务实验分析流程 100+物种,1000+转录因子的实战经验。 无需抗体,高通量鉴定转录因子的下游基因,蓝景科信已助力客户在许多期刊发表文章,例如:Molecular Plant,The Plant Cell,Plant Physiology等。 产品介绍: 品牌其他品牌适用领域科研 ...
3.2.2. 对片段化后的基因组DNA进行筛选。 3.2.3. 取适量片段筛选后的基因组DNA进行亲和纯化文库的构建,具体方法详见NOVA-5188-01-NEXTflex-Rapid-DNA-Seq-kit-2.0建库试剂盒说明书(BIOO SCIENTIFIC)。 3.2.4. 文库构建结束后进行质检。 四、体外无细胞蛋白表达与检测 4.1. 体外无细胞蛋白表达的主要试剂 4.1.1...
DAP-seq具有与ChIP-seq同样的功能。通过体外蛋白表达技术,表达出带有标签的转录因子,和基因组DNA文库在体外进行结合,然后分离出所有与转录因子结合的DNA,再使用高通量测序,找到转录因子的结合位点。 DAP-seq是ChIP-seq的重要补充方法,可以应用于模式和非模式物种,一般来说,有参考基因组的物种都可以进行DAP-seq,如果没...
DAP-seq可以分为以下三个阶段 转录因子的无细胞表达 1、将转录因子TF蛋白连上一个Halo 标签，这个标签...
一、为何选择DAP-seq？二、实验流程概述 1. 前期准备（1）样本准备：足量样本、含有目的转录因子的质粒（需提供测序结果）（2）样本重复：针对同一个转录因子可以不设置重复样本；如果想设置重复样本，建议两到三个，且一次性完成重复实验（3）分析信息准备：本研究物种匹配的成熟的基因组信息（包括基因...
DAP-seq 技术实验流程和原理和适用物种(对象)范围 DAP-seq 在基因组水平上,鉴定转录因子的结合位点(transcription factor binding sites, TFBS)非常重要。ChIP-seq 是进行体内检测 TFBS 的主要方法。然而,ChIP-seq 依赖于抗体质量,这对低表达的蛋白质具有很大的挑战性。所以,ChIP-seq 通常在规模上受到限制,难以进行...
DAP-seq具有与ChIP-seq同样的功能。通过体外蛋白表达技术，表达出带有标签的转录因子，和基因组DNA文库在体外进行结合，然后分离出所有与转录因子结合的DNA，再使用高通量测序，找到转录因子的结合位点。2、DAP-seq和ChIP-seq的特点 3、关于蓝景科信 蓝景科信提供DAP-seq全流程技术服务+个性化数据分析，与中国科学院、...