CUT&Tag使用ProteinA/G-Tn5融合蛋白直接结合目标蛋白，免除了传统方法的交联步骤，大幅降低背景噪声，并实现高分辨率的结合位点检测。CUT&Tag技术流程包括以下关键步骤：首先，使用ConA磁珠结合细胞膜上的糖蛋白，提取细胞核或直接利用核样本，同时通过洋地黄皂苷（digitonin）透化细胞膜，增强核膜通透性。接着，加入特异性...
CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白(ChiTag),其中Protein A/G能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时,首先将细胞与磁珠混合,然后进行靶蛋白特异性抗体(一抗)孵育,使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号,接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体,使得转座体进入细胞并与抗体结合,这样就把转座体间接的固定在靶蛋白...
CUT&Tag是蛋白-DNA互作的一大革新技术,它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀,而是通过针对靶蛋白(如转录因子、染色质重塑蛋白)的抗体和Protein A的介导,使得与Protein A融合的Tn5酶(Tagmentase)在切割DNA片段的同时在序列两端加上测序接头,经PCR扩增后形成可以直接用于高通量测序的文库(具体参考图1)。使用CUT&Tag,可以...
在进行CUT&Tag实验时，首先进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，同理接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在靶蛋白上，随后加入Mg2+，激活Tn5酶的切割活性，切断靶蛋白结合的DNA区域。由于Tn5连有测序接头，...
CUT&Tag主要步骤为：（1）提取细胞核并与磁珠结合：可以用活细胞，也可以使用抽核的细胞核。ConA磁珠能与细胞膜上的糖蛋白结合，使用洋地黄皂苷（digitonin）透化细胞膜。（2）一抗、二抗结合：一抗是针对靶蛋白的特异性抗体，一抗孵育后，用含洋地黄皂苷的洗涤缓冲液快速洗涤，然后将细胞核与二抗一起孵育。（3）...
CST为了帮助科研人员更快的获得可靠的实验结果,进一步扩大了蛋白质-DNA互作研究产品组合,重磅推出了完整的CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)解决方案,包括CUT&Tag试剂盒(#77552)、建库试剂盒(#47415)、抗体和适用于细胞以及组织的实验步骤说明书。
CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白（ChiTag），其中Protein AG能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时，首先将细胞与磁珠混合，然后进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是一种新型DNA-蛋白互作研究技术,主要用于研究转录因子或组蛋白修饰在全基~因组上的结合位点。CUT&Tag的核心原理是利用抗体识别目标蛋白或特定的染色质修饰标记,并通过蛋白酶Tn5转座酶(Tagmentase)在目标位点上进行高效的DNA片段化和文库构建。Stephen Henikoff团队于2019...
一、CUT&Tag技术发展历程 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing) 因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为一直以来研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(10...
CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白(ChiTag),其中Protein A/G能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时,首先将细胞与磁珠混合,然后进行靶蛋白特异性抗体(一抗)孵育,使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号,接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体,使得转座体进入细胞并与抗体结合,这样就把转座体间接的固定在靶蛋白...