CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是一种通过抗体引导转座酶靶向切割DNA的表观遗传学技术，其核心原理可类比为“分子导航+分子剪刀”：抗体定位：特异性抗体如同“GPS”，在细胞内精准识别目标蛋白。转座酶切割：蛋白A/G-Tn5融合酶结合抗体后，激活的Tn5转座酶在目标位点附近同
CUT&Tag使用ProteinA/G-Tn5融合蛋白直接结合目标蛋白，免除了传统方法的交联步骤，大幅降低背景噪声，并实现高分辨率的结合位点检测。CUT&Tag技术流程包括以下关键步骤：首先，使用ConA磁珠结合细胞膜上的糖蛋白，提取细胞核或直接利用核样本，同时通过洋地黄皂苷（digitonin）透化细胞膜，增强核膜通透性。接着，加入特异性...
CUT&Tag是研究蛋白和DNA互作新兴的实验方法,该方法是通过蛋白特异性抗体引导Protein A-Tn5酶在目标蛋白结合的DNA位置进行切割,并且在序列两端加上测序接头,经过PCR扩增后形成可用于高通量测序的文库,随后对文库进行测序分析从而解析与目标蛋白结合的DNA片段。 CUT&Tag技术原理 02 实验流程 CUT&Tag实验流程较为简便,首先...
首先，样本准备是实 Cut&Tag实验的基础。细胞与ConA磁珠的结合是一项关键的技术，磁珠在实验中起到了固定和分离细胞的作用。需要经过磁珠的制备、细胞的预处理、磁珠与细胞的结合以及结合产物的洗涤与分离等多个环节。抗体的孵育过程同样重要。首先，在缓冲液中加入预冷的一抗体进行孵育，促进抗体与磁珠-细胞复合物的...
Cut & Tag首先利用固定在刀豆蛋白A（ConA）磁珠上的抗体精准定位到基因组上的目的蛋白，然后将二级抗体作为Tn5转座酶的锚定物，在靶蛋白结合位点附近引导染色质DNA的切割的同时插入NGS测序接头，进而通过测序技术获取目的蛋白结合的DNA序列信息。图片来源于网络 二、操作流程 01 实验前准备 （1）样本准备 细胞样本：＞...
CST为了帮助科研人员更快的获得可靠的实验结果,进一步扩大了蛋白质-DNA互作研究产品组合,重磅推出了完整的CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)解决方案,包括CUT&Tag试剂盒(#77552)、建库试剂盒(#47415)、抗体和适用于细胞以及组织的实验步骤说明书。
使用CUT&Tag,可以大大降低细胞投入量以及操作时间,一天内就可以得到高质量的高通量测序文库。 CUT&Tag是蛋白-DNA互作的一大革新技术,它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀,而是通过针对靶蛋白(如转录因子、染色质重塑蛋白)的抗体和Protein A的介导,使得与Protein A融合的Tn5酶(Tagmentase)在切割DNA片段的同时在序列...
目标蛋白CUT&Tag通常只做一种阴性对照：不加一抗，或加入IgG抗体。而R-loop CUT&Tag实验，建议额外增加一种阴性对照：先加入RNase H或RNase A消化R-loop中的RNA链，此时R-loop的丰度大幅减少或消失，再加入一抗S9.6，则S9.6抗体的结合减少或不能结合，信号相比阳性样本减少或消失，从而发挥了阴性对照的作用，...
CUT&Tag技术的核心是在Tn5上融合了protein A/G抗体结合功能域的转座体pAG-Tn5。在进行CUT&Tag实验时，首先进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，同理接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在靶蛋白上，随后...
CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白（ChiTag），其中Protein AG能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时，首先将细胞与磁珠混合，然后进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在...