(一)实验材料准备 CUT&Tag技术的实验材料准备较为关键。首先,需选择高质量的抗体,确保其特异性和亲和力,以准确识别目标蛋白,建议选择CHIP级别或者是CUT&Tag-Seq级别的抗体。其次,准备磁珠,用于捕获与抗体结合的复合物。此外,还需准备合适的酶,如pA-Tn5转座酶,用于切割和标记DNA。同时,要确保实验中使用的各种缓冲液...
目前单细胞CUT&Tag技术主要包括以下几种方法:依赖特殊装置如Takara ICELL8的分选技术、CoBATCH技术、利用微流控芯片分离流动槽中的细胞、利用微液滴制备装置将单细胞分离到微液滴的技术、以及利用微孔和组合标签技术等方法。这些技术方法提供了从单细胞水平到高通量水平的多种选择,以适应不同的研究需求和实验条件。那...
http://www.vazyme.com/product/279.htmlCUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法,通过将Protein G或Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶融合,形成兼具双重活性的新型融合酶(Hyperactive pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase),在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附
CUT&Tag:Cleavage Under Targets and Tagmentation,靶向剪切和转座酶,这里用的酶是Protein A/G融合的Tn5转座酶,是CUT&RUN技术的改进版。 两种技术用的酶不一样,Tn5转座酶可以插入测序标签,因此CUT&Tag比CUT&RUN节省了更多建库时间,1天就可以完成建库。 2.2 实验流程 整个实验流程可以分为6步: 收集细胞,刀豆蛋白...
CUT&Tag技术的核心是使用Protein A/G-Tn5转座体复合物(pA/G-Tn5),在抗体引导下,pA/G-Tn5直接结合目的蛋白并切割目的蛋白附近的DNA序列,切割后的DNA片段直接用于建库测序。 二、操作流程 1.细胞收集:收集适量的细胞,通常为10^5-10^7个细胞。 2.抗体孵育:将细胞与特异性抗体在冰上孵育一段时间,使抗体与目的...
1、CUT&Tag耗时短(10h)、无需免疫共沉淀、无需超声破碎等复杂步骤 图7. CUT&Tag技术与ChIP-seq技术的实验步骤比较 在进行CUT&Tag实验时,抗体、转座体经过依次孵育进入细胞,加入Mg2+后,激活转座体的切割活性。此过程不涉及超声破碎、免疫共沉淀等复杂步骤,将实验压缩至10h以内。
表1 CUT&Tag与ChIP-seq实验相比具有的优势 CUT&Tag在植物上的应用 2019年Kaya-Okur等人首先在哺乳动物中使用CUT&Tag技术提供了高分辨率测序来分析不同的染色质组分,通过在低样本量和单细胞水平分析组蛋白修饰、RNA聚合酶II和转录因子的表达证明了CUT&Tag技术的实用性 (Kaya-Okur et al., 2019)。这是首次运用CUT...
CutTag技术在基因组学研究中具有广泛应用,包括但不限于以下几个方面: 1) DNA剪切修饰研究:通过分析剪切位置及剪切状态,可以揭示DNA剪切修饰在基因调控中的作用机制。 2)染色体结构研究:通过揭示不同细胞和组织中染色质的二级结构,可以加深对基因组空间组织的理解。 3)疾病研究:通过比较正常和疾病状态下的DNA剪切修饰...
cut-tag技术原理 118302023-05-11 15:41:36未经作者授权,禁止转载 您当前的浏览器不支持 HTML5 播放器 请更换浏览器再试试哦~2 投币 1 4 利用连有刀豆蛋白A的磁珠结合细胞,并使用非离子去污剂洋地黄皂苷进行细胞膜通透。通过针对靶蛋白的一抗、相应二抗和Protein A/G的介导,使得与Protein A/G融合的转座子...
一、CUT&Tag技术发展历程 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation Sequencing) 因能真实、完整地反映靶蛋白与DNA序列的结合情况,因而成为一直以来研究DNA-蛋白相互作用的经典方法。但ChIP-Seq继承了ChIP的难点与局限性:需要大量细胞投入(106-107),甲醛交联易导致假阳性或假阴性,对染色质的完整性、免疫沉淀抗体的特异性...