R-loop CUT&Tag实验的设计与传统的CUT&Tag实验相似。主要步骤包括将细胞与ConA beads结合、细胞膜打孔、孵育一抗和二抗、加pA/G-Tn5、清洗后进行转座、及回收片段化的产物进行扩增。不过,需要注意的是,在阴性对照设置上,R-loop CUT&Tag实验建议增加使用RNaseH或RNaseA消化R-loop中的RNA链的步骤,这一操作能显著...
实名赞美Steven Henikoff,是CUT&Tag和Cut&RUN实验方法的创始者,解决了少量样品中蛋白质结合DNA位点的检测。 图1,他们实验室在维护一个实验步骤的网站(链接)内关于这两个实验的流程,有问必答,回答极其迅速且耐心具体(亲测有效)。 图2,疫情期间,Steven把小心实验设备搬回家,自娱自乐发表了《在家做蛋白结合位点实验...
主要步骤包括将细胞与ConA beads结合、细胞膜打孔、孵育一抗和二抗、加pA/G-Tn5、清洗后进行转座、及回收片段化的产物进行扩增。不过,需要注意的是,在阴性对照设置上,R-loop CUT&Tag实验建议增加使用RNaseH或RNaseA消化R-loop中的RNA链的步骤,这一操作能显著减少或消失R-loop的丰度,进一步验证信号的真实性。 另...