目标蛋白CUT&Tag通常只做一种阴性对照：不加一抗，或加入IgG抗体。而R-loop CUT&Tag实验，建议额外增加一种阴性对照：先加入RNase H或RNase A消化R-loop中的RNA链，此时R-loop的丰度大幅减少或消失，再加入一抗S9.6，则S9.6抗体的结合减少或不能结合，信号相比阳性样本减少或消失，从而发挥了阴性对照的作用，...
CUT&Tag实验原理 在基~因组和表观遗传学研究中，探索DNA-蛋白互作机制是理解基~因调控的关键。转录因子通过结合启动子或增强子区域的特定DNA序列，调控RNA聚合酶的招募及基~因转录启动，其结合效率决定基~因表达的时空模式。组蛋白作为染色质的核心组成，通过翻译后修饰（如乙酰化、甲基化等）调控染色质开放程度和...
CUT&Tag技术的核心是将Tn5转座酶进行改造,融合proteinA/G(形成pA/G-Tn5融合蛋白),其优点是特异性强,灵敏度高,背景噪音较低,重复性好,并且对样本要求量少。现在,CUT&Tag已成为组蛋白翻译后修饰(PTM)和从包括单细胞在内的少数细胞中选择转录因子的强大分析技术。 在CUT&Tag实验过程中如何保证实验的成功率呢?
CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白（ChiTag），其中Protein AG能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时，首先将细胞与磁珠混合，然后进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号，接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体，使得转座体进入细胞并与抗体结合，这样就把转座体间接的固定在...
CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)是一种专注于DNA-蛋白互作研究的革新性工具,主要用于识别转录因子或组蛋白修饰在全基~因组范围内的结合位点。CUT&Tag分析利用酶切与转座酶标记技术,精准定位转录因子或组蛋白修饰在基~因组中的结合位点,助力研究DNA-蛋白互作机制,为基~因组和表观遗传学研究提供精准...
CUT&Tag需要的细胞起始投入量低,使用试剂盒可以进行低至60个细胞的实验,这是传统的需要百万级细胞起始量的ChIP-Seq所不能及的。2019年,Henikoff团队将CUT&Tag实验首次应用于单细胞,将大量的K562细胞进行CUT&Tag实验,Tn5切割后,通过Tak...
实验样品：棉花 抽提细胞核流程图 Tips：1.如果样品少，可以不进行过滤操作；2.抽提完细胞核后，可以无缝衔接CUT&TagAssay Kit (pAG-Tn5) for Illumina (RK20265);试剂配方:Nuclearisolation buffer A (10 mM Tris pH 8.0, 10 mM KCl, 0.5 mM spermidine)50 mL for one sample;Nuclearisolation...
CUT&Tag的核心原理是利用抗体识别目标蛋白或特定的染色质修饰标记，并通过蛋白酶Tn5转座酶（Tagmentase）在目标位点上进行高效的DNA片段化和文库构建。Stephen Henikoff团队于2019年研发了CUT&Tag，作为ChIP-Seq（免疫共沉淀测序）的改进和替代方法。CUT&Tag技术凭借其高灵敏度、低背景噪音和低细胞量需求，已成为揭示基~...
图5. 单细胞CUT&Tag测序流程(Henikoff,2019) Part III 翌圣CUT&Tag产品重磅上线 翌圣生物CUT&Tag试剂盒相较于传统的ChIP-seq,优化了反应体系和实验操作流程,文库时间更短(仅需7小时),起始样本要求更低,抗体投入量更少,文库产量更高等优点,是蛋白质-DNA互作研究技术的又一颠覆性创新。 1.更高的文库质量。