目标蛋白CUT&Tag通常只做一种阴性对照：不加一抗，或加入IgG抗体。而R-loop CUT&Tag实验，建议额外增加一种阴性对照：先加入RNase H或RNase A消化R-loop中的RNA链，此时R-loop的丰度大幅减少或消失，再加入一抗S9.6，则S9.6抗体的结合减少或不能结合，信号相比阳性样本减少或消失，从而发挥了阴性对照的作用，...
然后,利用CUT&Tag鉴定RHOX10的靶基因。最后,利用qPCR和EMSA来做功能验证。 结合案例文章,我们可以学习如何利用CUT&Tag解析转录因子功能。首先,根据研究目的确定目的蛋白的特征,比如定位、家族分析、同源分析以及突变体功能分析等。然后,利用CUT&Tag寻找目的基因的靶基因,通常也会联合转录组进行相关基因的表达分析。最后,...
CUT&Tag实验原理与流程 CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白(ChiTag),其中Protein A/G能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时,首先将细胞与磁珠混合,然后进行靶蛋白特异性抗体(一抗)孵育,使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号,接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体,使得转座体进入细胞并与抗体结合,这样就把转...
图 ChIP-Seq与CUT&Tag实验程序比较（Zheng et al., 2020）。尽管CUT&Tag与ChIP方法在某些方面类似，但CUT&Tag实验的起始材料是活的可渗透细胞或分离的细胞核，而不是ChIP-seq中使用的甲醛交联的细胞或组织。CUT&Tag有望将蛋白与染色质DNA互作的研究变成了一种类似PCR反应的常规操作，对基因调控、表观遗传等领域...
Western Blot(蛋白质印迹法,WB)实验操作演示 10:42 A112 TUNEL细胞凋亡检测(石蜡切片样本)实验操作演示 05:05 CUT & Tag 实验注意事项 03:06 CUT&Tag实验操作演示(TD903) 13:08 磁珠法全自动核酸提取实验操作演示(VNP-32P&RM201) 03:35 CUT&Tag实验操作演示(TD901/TD902) 16:53 A211 Annexin ...
图2.CUT&Tag实验流程图。 二、CUT&Tag数据展示 Henikoff等通过传统ChIP-Seq、CUT&RUN、CUT&Tag三种方法对K562细胞中组蛋白修饰H3K27me3进行研究,结果显示,在相同的数据量(8M Reads)情况下,三种方法的染色质景观相似,但ChIP-Seq的背景较高,50M Reads的 ChIP-Seq才能得到与8M Reads CUT&Tag相当的染色质景观。总...
对DNA样品的检测主要包括2种方法：(1) 琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解程度以及是否有RNA污染 (2) Qubit对DNA浓度进行精确定量 2、文库构建 CUT&Tag技术的核心是pAG-Tn5融合蛋白（ChiTag），其中Protein AG能够结合抗体。在进行CUT&Tag实验时，首先将细胞与磁珠混合，然后进行靶蛋白特异性抗体（一抗）孵育，使抗体进入...
4.磁珠或其他回收方法的选择:根据实验需求和DNA片段的大小,选择合适的磁珠或其他回收方法。 5. PCR扩增条件:优化PCR扩增条件,以确保扩增效率和特异性。 6.文库构建和测序:按照建库试剂盒和测序平台的说明书进行操作,确保实验结果的准确性和可靠性。 CUT&Tag技术是一种高效、灵敏的蛋白质-DNA互作关系研究方法,但在...
图1 CUT&Tag建库原理及实验流程 CUT&Tag系列产品 ABclonal针对不同客户群体需求，提供了可灵活搭配选择的产品货架，包括CUT&Tag试剂盒, 转座体, 单酶, 以及经过验证的CUT&Tag抗体（ABclonal自产抗体）。pAG-转座酶的酶切活性 不同起始量的DNA样本加入1 μL pAG-Tn5 Transposome在55℃反应15 min，搭配 ABclonal...