A112 TUNEL细胞凋亡检测(石蜡切片样本)实验操作演示 05:05 CUT & Tag 实验注意事项 03:06 CUT&Tag实验操作演示(TD903) 13:08 磁珠法全自动核酸提取实验操作演示(VNP-32P&RM201) 03:35 CUT&Tag实验操作演示(TD901/TD902) 16:53 A211 Annexin V-FITC PI凋亡检测实验操作演示 06:00 荧光探针法检测...
作者建立了两个生物学重复,用于H3K4me3抗体的CUT&Tag反应,以IgG抗体的CUT&Tag反应作为对照,并采用相同的材料进行H3K4me3抗体ChIP实验,以不添加H3K4me3抗体的ChIP反应作为对照,对CUT&Tag组和ChIP组进行相关性分析,发现CUT&Tag与IgG对照的相关性非常低(r=0.01),而ChIP-seq组与对照组的相关性高(r=0.89),表明CUT&Tag...
实验样品：棉花 抽提细胞核流程图 Tips：1.如果样品少，可以不进行过滤操作；2.抽提完细胞核后，可以无缝衔接CUT&TagAssay Kit (pAG-Tn5) for Illumina (RK20265);试剂配方:Nuclearisolation buffer A (10 mM Tris pH 8.0, 10 mM KCl, 0.5 mM spermidine)50 mL for one sample;Nuclearisolation buffer...
CUT&Tag-qPCR与ChIP-qPCR类似,定量的长度、方法、引物设计等几乎完全一致。一般的实验流程为:细胞与磁珠结合—一抗孵育—二抗孵育—转座体孵育—片段化—DNA提取—qPCR检测。整个实验流程不超过10小时。 二:CUT&Tag实验结果进行高通量测序(NGS)分析 CUT&Tag本身是一种高通量测序技术,zui终所获取的实验结果也是测序文...
R-loop CUT&Tag实验与常规目标蛋白的CUT&Tag实验步骤基本一样，主要包括细胞与ConA beads结合（细胞无需交联），细胞膜打孔，分别孵育一抗、二抗、pA/G-Tn5，清洗后转座，回收片段化产物后进行扩增。二者仅在阴性对照、转座后的产物这两点有区别：区别一：阴性对照 目标蛋白CUT&Tag通常只做一种阴性对照：不加一抗...
multi-CUT&Tag结果中每种蛋白表位的基因组图谱与单抗体对照实验中观察到的基本一致。另外，ChIP-seq数据（来源于已发表文献）的peak处调用multi-CUT&Tag实验中每个蛋白表位图谱的富集情况，发现无论单个抗体还是multi-CUT&Tag都与相同蛋白表位的ChIP-seq图谱高度一致。2、multi-CUT&Tag具有高灵敏度和特异性单个抗体...
7. 做CUT&Tag实验的时候,阴性对照和阳性对照怎么设置,作用是什么? 与ChIP 不同,该实验方案不需要 input 样本,但需要添加阴性对照和阳性对照。针对抗体的阳性对照可以采用RNA Pol II/ 组蛋白,证明系统没有问题。阴性对照使用与一抗相同种属的IgG,阳性对照,阴性对照证明抗体特异,实验结果可信。
因为王茂军老师课题组有同学在做CUT&Tag,我脑海里第一个出现的也是CUT&Tag,两者的研究内容虽然不同,但是使用的分析方式是非常相似的。正好看到菲沙基因做过这两个技术的讲座,这篇博客就整理一下介绍这两个技术以及衍生技术的分析原理,加深下自己的理解,详细的分析流程留到以后需要做的时候再记录。
如果有多个CUT&Tag样本处理,为了确保反应的一致性和准确性,建议首先在单个1.5-2 mL离心管中批量处理所有反应需要的ConA磁珠,之后再将磁珠分装到8连排的PCR管中,这样可以确保每个样本中磁珠的数量和活性保持一致,从而提高实验结果的可比性和可靠性。 3. 磁珠与细胞核结合 激活的ConA磁珠与细胞核结合,该步骤需要10-...