4.CRISPR/Cas9敲除细胞系主要应用方向 CRISPR/Cas9敲除细胞系广泛应用于许多领域,特别是在遗传疾病治疗、疾病相关基因的筛选和检测、肿瘤治疗、动植物转化以及病原微生物的预防等领域具有巨大的潜力,可以有效改善人类的生活质量。 5.CRISPR/Cas9敲除细胞系面对的挑战 尽管之前的解释表明 CRISPR/Cas9 是一种很有前途的方...
今天我们聊聊如何利用CRISPR/Cas9技术进行稳定基因敲除细胞系的构建,以293T细胞为例。 一些实验前的说明 sgRNA验证:在实验开始前,可以通过sgRNA在线验证,筛选高效率的sgRNA用于敲除细胞系的构建。 基因拷贝数:建议在开始实验之前确定目标基因的拷贝数。许多永生化细胞系,尤其是癌细胞系,不是二倍体,因此可以具有3个或更...
1、测序验证 提取阳性单克隆细胞株的基因组,将靶标基因酶切克隆至T载体后测序,以确定是否敲除成功。 实验结果示例: 该基因有两个单克隆细胞株,A1和A2。 单克隆细胞A1的目的基因在sgRNA2位置出现两种突变形式,分别缺失1个和19个碱基,在新序列的第337位和第355位碱基提前出现终止密码子。 单克隆细胞A2的目的基因...
赛尔瑞成采用CRISPR/Cas9系统,提供基因敲除细胞系构建服务。赛尔瑞成根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,进而敲除目的基因,并进行单克隆筛选,获得基因敲除单克隆细胞系。 CRISPR/Cas9系统作为新一代基因编辑工具,因其构建方便、设计灵活,操作简单、效率高成本低,成为基因敲除的新一代利器。该系统...
4]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术用于永生化HUVEC细胞系,成功获得仅敲除PECAM-1细胞质结构域的HUVEC细胞系...
4.CRISPR/Cas9敲除细胞系主要应用方向 CRISPR/Cas9敲除细胞系广泛应用于许多领域,特别是在遗传疾病治疗、疾病相关基因的筛选和检测、肿瘤治疗、动植物转化以及病原微生物的预防等领域具有巨大的潜力,可以有效改善人类的生活质量。 5.CRISPR/Cas9敲除细胞系面对的挑战 ...
CRISPR/Cas9基因敲除细胞系/细胞株 赛尔瑞成采用CRISPR/Cas9系统,提供基因敲除细胞系构建服务。赛尔瑞成根据目的基因序列设计合成sgRNA,将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞,进而敲除目的基因,并进行单克隆筛选,获得基因敲除单克隆细胞系。 CRISPR/Cas9系统作为新一代基因编辑工具,因其构建方便、设计灵活,操作简单、效率高成本低...
在细胞上做基因研究的一般的过程就是:利用CRISPR-Cas9先做基因除 (Gene Knockout) ,获得基因敲除细胞系纯合细胞:然后分析相关的生物学表型;最后做为对照还需要将原敲除的基因回补会到原细胞系中,做为对照细胞进行实验对比。而利用Cas9进行细胞敲除之后,细胞回补实验室要注意哪些问题? 特别需要考虑的技术原理是那些?如...
恒一生物科研技术团队已全面推出构建CRISPR/Cas9敲除细胞系服务,并构建了小鼠小肠上皮细胞、小鼠前脂肪细胞、人肝细胞、人乳腺上皮细胞、山羊乳腺上皮细胞、奶牛乳腺上皮细胞和...
找到纯合突变的细胞株,将对应细胞复苏扩繁拿到细胞系,提取蛋白进行敲除基因对应蛋白的定量,验证基因敲除...