基因编辑小鼠主要分为基因敲除(KO)、条件性敲除(CKO)及基因敲入(KI)等几种方式。其中基因敲除鼠(KO)是基因编辑鼠中常用、也是容易构建的模型鼠,但是这样一种模型鼠的设计和构建过程依然复杂。本文就以CRISPR/Cas9技术为例,为大家科普一下基因敲除鼠的设计、构建、鉴定与使用方法。 基于CRISPR/Cas9技术基因敲除鼠的...
目前邦耀实验室已经成熟掌握利用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术,并且成功构建了多种基因敲除、敲入及条件性敲除模型,如果您的实验需要基因编辑鼠或者您有相关问题,欢迎与我们联系! 阅读原文,从小鼠代购,饲养到文中提到的 KO、CKO、KI 都可以一站式完成。 联系方式: 电话:021-64340008 邮箱:service@bioraylab.com 参考文...
利用CRISPR/Cas9技术构建CS-CREM小鼠 在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-...
实验材料:Cas9 mRNA、sgRNA和荧光素酶载体、小鼠胚胎等。实验步骤:1. 设计sgRNA,选择一个安全港区靶位点用于敲入实验;2. 制备Cas9 mRNA和sgRNA,以及线性化的荧光素酶表达质粒;3. 将Cas9 mRNA、sgRNA和荧光基因共同注射到受精卵或2-细胞期胚胎中;4. 将注射胚胎移植到代孕母鼠子宫中,孕育至出生;5. 对新生小鼠进行...
近日,《生物技术通报》在线发表了题为《利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株》的研究论文。本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在小鼠NIH3T3细胞中进行Quaking基因的敲除,建立稳定的小鼠Quaking基因敲除细胞株,并初步...
今天小编尝试说一说使用CRISPR/Cas9技术构建Knockin小鼠用到的donor设计时需要考虑的原则。 1、knockin位点与DSB距离:使用HDR(Homology Directed Repair)模板创造特定的突变或者插入一段序列需要在插入序列两端加上一段同源序列。通常修饰的插入位点应距DSB不超过100bp,最理想的是不超过10bp。距离达到200bp可能也会有效,...
利用CRISPR/Cas9技术构建CS-CREM小鼠 在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-...
▌基因敲入(Knock-in, KI)小鼠 基本原理:通过基因编辑技术,把外源基因序列敲入到小鼠特定的基因位点,利用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。 基因敲入(KI)原理示意图 应用:一般而言,导入人源基因可以直接研究该基因的功能,或是构建人类疾病模型;而导入标签基因则可以观察某些特定基因的表达,或是观察细胞、组织的状态...
在人类肺癌中,STK11、PTEN、TP53和KRAS是最常见的突变基因,基因工程小鼠模型(GEMM)是分析肺癌中癌症相关基因功能的关键。 本研究以这几个基因为研究对象,利用CRISPR/Cas9构建小鼠肺腺癌模型(图2a),比较Stk11和Pten在结合Trp53缺失和Kras功能获得的肺癌中的作用。小鼠接种含有SKT的AAV病毒(图2c), 10周后检查肺。
利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰小鼠模型,基因敲除的定制服务 首先,需要设计针对目标基因的 sgRNA。通过对目标基因的序列进行分析,选择合适的位点进行编辑。这些位点通常位于基因的编码区或调控区。然后,将 sgRNA 与 Cas9 蛋白的表达载体构建好。 接下来,通过显微注射等方法将 sgRNA - Cas9 载体导入小鼠的受精卵中。Ca...