利用CRISPR/Cas9技术构建CS-CREM小鼠 在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-...
利用CRISPR/Cas9技术构建定点突变小鼠品系 CRISPR/Cas9 技术原理 CRISPR/Cas9 系统源于细菌的适应性免疫防御机制。其中,Cas9 是一种核酸内切酶,在整个基因编辑过程中起着 “分子剪刀” 的关键作用。而引导 RNA(…
因此,通过CRISPR/Cas9 技术构建了Apoe基因敲除小鼠模型(Apoe KO小鼠),检测分析了Apoe对血脂代谢以及诱导动脉粥样硬化的功能作用,为Apoe体内功能及靶向机制研究提供模型资源。 研究方法:此研究通过CRISPR/Cas9技术针对C57BL/6J小鼠Apoe基因设计2个sg...
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实验目的:使用CRISPR-Cas9系统敲除小鼠P53基因,获得P53基因敲除小鼠模型。实验原理:Cas9蛋白与特异性sgRNA在体内形成复合物,识别并切割P53基因的指定位点,经过细胞修复最终导致基因敲除。实验材料:1. Cas9质粒(px458)和sgRNA质粒:分别表达SpCas9和sgRNA;2. 用于胚胎注射的Cas9 mRNA和sgRNA;3. 小鼠原代成纤维细胞(MEF)...
实验目的:使用CRISPR-Cas9系统在小鼠胚胎中敲入荧光素酶报告基因,用于发育过程中的成像研究。实验原理:Cas9蛋白与sgRNA通过同源重组将线性化的荧光素酶报告基因敲入到特定的基因座,并在体内实现稳定表达。实验材料:Cas9 mRNA、sgRNA和荧光素酶载体、小鼠胚胎等。实验步骤:1. 设计sgRNA,选择一个安全港区靶位点用于敲入实验...
CRISPR/Cas9 技术的出现为构建基因敲入小鼠提供了一种高效的方法。首先,确定要敲入的目标基因和敲入位点是关键的第一步。这需要对目标基因的功能以及小鼠基因组有深入的了解。选择合适的敲入位点可以确保敲入的基因能够在小鼠体内正确表达和发挥作用,同时避免对小鼠的正常生理功能产生不良影响。
小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)具有自我更新和多向分化的能力,利用 CRISPR - Cas9 技术构建基因敲除小鼠胚胎干细胞系为基因功能研究和疾病模型的建立提供了强大的工具。 首先,确定要敲除的目标基因。这需要根据研究目的和已知的基因功能来选择。例如,如果研究某个与发育相关的基因,就将其确定为敲除目标。
利用CRISPR_Cas9 技术进行Adcy3 基 因编辑小鼠模型的构建与鉴定 摘要:目的:利用CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR- As-sociated 9)技术构建成功Adcy3 (Cyclic Adenosine- 3',5'-Monophosphate, cAMP)下游插入mCherry 基因小鼠品系,为深入研究该基因的 功能及相关疾病的治疗...
图1.在小鼠胚胎上使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑创建转基因小鼠的示意图。通过共注射 Cas9 mRNA 和向指导 RNA,多个基因靶标可以在小鼠胚胎中一次敲除。(改编自 Yang H,Wang H 和 Jaenisch R. Nat Protoc。2014 年 8 月;9(8):1956-68.) Sigma-Aldrich 是为基因组编辑提供工具和定制服务的领导者,包括 ZFN ...