基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组DNA为模板进行PCR,并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小,根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定,今天我们就开始学习CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定。
在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-IbΔC-X在C-CREM小鼠中是不可见的。
在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-IbΔC-X在C-CREM小鼠中是不可见的。
基因编辑小鼠主要分为基因敲除(KO)、条件性敲除(CKO)及基因敲入(KI)等几种方式。其中基因敲除鼠(KO)是基因编辑鼠中常用、也是容易构建的模型鼠,但是这样一种模型鼠的设计和构建过程依然复杂。本文就以CRISPR/Cas9技术为例,为大家科普一下基因敲除鼠的设计、构建、鉴定与使用方法。 基于CRISPR/Cas9技术基因敲除鼠的...
5. 基因型鉴定(1周) 细胞质注射法获取F0转基因小鼠 CRISPR Cas9蛋白制备流程Cas9蛋白结构 应用 •简化了流程,缩短了制作周期,降低了成本 •可以制作多个基因同时敲除的动物 •可以制作不同种属的基因敲除动物.如猪、牛、斑马鱼 几种常见哺乳动物基因编辑方法比较 ...
采用CRISPR/Cas9基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点插入到受精卵的Y染色体上,获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配,通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是( ) A. 基因编辑处理的受精卵在体外培养时,不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液 B. 基因编辑处理的受精卵...
近日,《生物技术通报》在线发表了题为《利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株》的研究论文。本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在小鼠NIH3T3细胞中进行Quaking基因的敲除,建立稳定的小鼠Quaking基因敲除细胞株,并初步...
例如，在小鼠模型中，可以使用CRISPR - Cas9技术敲除某个与发育相关的基因，研究其对小鼠胚胎发育的影响，确定该基因在发育过程中的具体作用。2. 基因调控网络研究 通过对多个基因进行编辑，可以研究基因之间的相互作用和调控网络。例如，同时对多个参与信号转导通路的基因进行不同方式的编辑（如敲除、激活等），可以...
我国科学家利用CRISPR/Cas9基因编辑技术(如图所示)对小鼠基因进行定点敲除或者替换,构建相应的模型小鼠应用于医学研究。回答下列问题:(1)科学家根据DNA靶片段序列设计单链引导RNA,随后可利用 ___技术进行体外扩增。(2)单链引导RNA能特异性识别靶向DNA序列,这一过程运用了 ___原则。结合后Cas9蛋白能剪切DNA,断开 __...