我国科学家利用CRISPR/Cas9基因编辑技术(如图所示)对小鼠基因进行定点敲除或者替换,构建相应的模型小鼠应用于医学研究。回答下列问题:(1)科学家根据DNA靶片段序列设计单链引导RNA,随后可利用 ___技术进行体外扩增。(2)单链引导RNA能特异性识别靶向DNA序列,这一过程运用了 ___原则。结合后Cas9蛋白能剪切DNA,断开 __...
基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异,以小鼠基因组DNA为模板进行PCR,并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小,根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定,今天我们就开始学习CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定。
3. mRNA显微注射受精卵(1月) 4. F0小鼠制作(2月) 5. 基因型鉴定(1周) 细胞质注射法获取F0转基因小鼠 CRISPR Cas9蛋白制备流程Cas9蛋白结构 应用 •简化了流程,缩短了制作周期,降低了成本 •可以制作多个基因同时敲除的动物 •可以制作不同种属的基因敲除动物.如猪、牛、斑马鱼 几种常见哺乳动物基因编辑方...
近日,《生物技术通报》在线发表了题为《利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株》的研究论文。本研究旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在小鼠NIH3T3细胞中进行Quaking基因的敲除,建立稳定的小鼠Quaking基因敲除细胞株,并初步...
利用CRISPR/Cas9技术构建CS-CREM小鼠 在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-...
▌基因敲入(Knock-in, KI)小鼠 基本原理:通过基因编辑技术,把外源基因序列敲入到小鼠特定的基因位点,利用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。 基因敲入(KI)原理示意图 应用:一般而言,导入人源基因可以直接研究该基因的功能,或是构建人类疾病模型;而导入标签基因则可以观察某些特定基因的表达,或是观察细胞、组织的状态...
▌基因敲入(Knock-in, KI)小鼠 基本原理:通过基因编辑技术,把外源基因序列敲入到小鼠特定的基因位点,利用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。 基因敲入(KI)原理示意图 应用:一般而言,导入人源基因可以直接研究该基因的功能,或是构建人类疾病模型;而导入标签基因则可以观察某些特定基因的表达,或是观察细胞、组织的状态...
flox鼠的基因型鉴定 01 引物设计 交付的F1代小鼠已验证过同源臂打靶的正确性,现只需通过验证目的基因小于1 kb的片段即可,一般设计在特异性好的loxP附近。 02 预期片段大小 条带1的大小为:F5/R5扩增的5'arm端的野生型; 条带2的大小为:F6/R6扩增的5'arm端的同源臂+loxP+敲入区域; ...
在本研究中,作者使用CRISPR/Cas9系统在小鼠(称为CS-CREM小鼠)中诱导心脏特异性的CREM-IbΔC-X过表达。 靶向策略如图2A所示,通过CRISPR/Cas9基因编辑,将靶基因成功整合到小鼠H11染色体中。对三种高危sgrna进行了可能的脱靶效应试验,研究表明在CS-CREM小鼠中脱靶效应和随机插入CREM-IbΔC-X在C-CREM小鼠中是不可见的...