两个两个loxp位点位于两条染色体上:易位 1.2 Cre-loxp系统删除作用 应用:条件性的敲除和条件性的表达 Cell Metab. 2013 Jul 2;18(1):9-20 需要两种小鼠: flox小鼠(flanking/flanked by LoxP,在需要敲除的目的基因两侧加入LoxP位点/在目的基因前面加上LoxP STOP LoxP序列)和Cre小鼠(前面往往有一个特异性的启动...
携带loxP 的小鼠被称为 Floxed 小鼠,当它与 Cre 小鼠交配后,Cre-Lox 系统开始工作,可以对两个 loxP 位点以内的基因进行重组,进而实现基因敲除、表达等目的。 1. 组织特异性敲除(conditional knockout, cKO) 当组织特异性 Cre 小鼠(具有组织靶向性的 Cre 小鼠品系很多)与 Floxed 小鼠配繁后,两个 loxP 位点位于...
通过常规基因打靶在基因组的靶位点上装上两个同向排列的loxp,并以此两侧装接上loxp的(loxP floxed)ES细胞产生“loxP floxed”小鼠。然后,通过将“loxP floxed”小鼠与Cre转基因鼠杂交(也可以用其他方式向小鼠中引入Cre重组酶),产生靶基因发生特定方式(如特定的组织特异性)修饰的条件性突变小鼠。在“loxP floxed”小...
最终完成Cre-loxP系统条件性靶基因小鼠研制的操作,通常需要通过floxed小鼠与相应Cre小鼠间的两步遗传交配繁殖过程。第一步交配,X基因Cre杂合小鼠(X基因Cre/+)与Y基因 floxed杂合小鼠(Y基因 lox/+,即CKO打靶Y基因),或Y基因floxed纯合小鼠(Y基因lox/lox)交配,获得X基因Cre/+; Y基因lox/+ 后代杂合小鼠。第二步交...
易位(Translocation):如果位点位于不同的 DNA 分子上,则会在 loxP 位点产生易位事件。 我如何使用 Cre-lox? Cre/lox 系统是一种成熟的研究工具,尤其是在小鼠转基因领域。下面列出了一些最常见的用途。 Cre 依赖的基因表达——在感兴趣的基因上游的任一侧(通常称为“lox-stop-lox”或“LSL”盒)放置一个带有 lo...
制备条件性基因敲除小鼠需要Floxed小鼠(即目的基因被LoxP序列锚定的小鼠)和Cre鼠两种小鼠。Cre小鼠即Cre重组酶在小鼠体内特定组织或细胞表达的小鼠,其Cre 基因的表达受控于一个特异性启动子,该启…
指导教师姚开泰教授答辩委员会主席答辩委员会成员肖东研究员陈系古教授姚开泰教授钟雪云教授安靓教授肖广惠教授论文评阅人陈系古教授顾为望教授黄冰副教授2010年5月26日广州硕士学位论文运用Cre/loxP系统在转基因小鼠体内条件性过表达人Cripto一1基因硕士研究生肖高芳硕士生导师姚开泰教授指导老师肖东研究员摘要研究背景和目的...
首先将loxP序列重组到需要删除DNA区域两端,该区域一般被称为flox区,获得的小鼠称为flox小鼠。Flox小鼠基因功能正常,可与在特定细胞或组织或特定时期表达Cre重组酶的Cre工具鼠交配后获得各种时空特异性基因敲除小鼠。 Flox区的选择需要考虑如下原则: 1、插入loxP的位置不能影响基因的正常功能。所以,loxP一般插入在exon两端...
基于Cre-loxP系统的基因敲除小鼠繁育 实验原理 基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,将目的基因用一段外源DNA序列(多采用筛选基因新霉素)替代,获得在整个发育时期的全身所有组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。 很多基因经常时多组织多器官表达的,传统的全身敲除...