5. 新型诱导性DD-cre小鼠模型的建立,成为未来Cre-loxP可诱导重组系统的补充 6. Cre小鼠构建策略建议性指导原则及需要考虑的因素概括 基因编辑小鼠模型是当今研究基因功能和致病机制的利器。业界重量级资深技术大咖为您详细解析:基因编辑小鼠模型应用中存在哪些风险与影响因素,如何设计有助于提升基因编辑小鼠模型研究结果的...
3Cre-loxP 基因敲除小鼠的构建方法1.构建 Flox 小鼠：首先，将 LoxP 序列插入到需要删除 DNA 区域的两端，这一区域通常被称为 flox 区。获得的小鼠称为 Flox 小鼠，其基因功能在正常情况下保持不变。2. 选择 Cre 工具鼠：根据实验需求，选择具有组织或细胞特异性启动子的 Cre 工具鼠。这些小鼠能够在特定的组织...
03 Cre-loxP 基因敲除小鼠的构建方法 1.构建 Flox 小鼠:首先,将 LoxP 序列插入到需要删除 DNA 区域的两端,这一区域通常被称为 flox 区。获得的小鼠称为 Flox 小鼠,其基因功能在正常情况下保持不变。 2. 选择 Cre 工具鼠:根据实验需求,选择具有组织或细胞特异性启动子的 Cre 工具鼠。这些小鼠能够在特定的组织...
在启动子和转基因编码序列之间适当插入“loxp-STOP-loxp, LSL”序列(转录终止元件),用以阻止基因的表达。Cre重组酶可以去除loxp位点间的终止元件,因此基因只在具有Cre活性的细胞中表达。与cKO条件性敲除小鼠两条等位基因都需要纯合不同,条件性表达小鼠通常只要有1条等位基因携带突变即可满足实验要求,因此基因型通常需是...
应用Cre/loxP进行条件性基因敲除的原则 如何应用Cre-loxP系统来获取特定的条件基因敲除小鼠呢? 首先将loxP序列重组到需要删除DNA区域两端,该区域一般被称为flox区,获得的小鼠称为flox小鼠。Flox小鼠基因功能正常,可与在特定细胞或组织或特定时期表达Cre重组酶的Cre工具鼠交配后获得各种时空特异性基因敲除小鼠。
最终完成Cre-loxP系统条件性靶基因编辑小鼠研制的操作,通常需要通过floxed小鼠与相应Cre小鼠间的两步遗传交配繁殖过程。第一步交配,X基因Cre杂合小鼠(X基因Cre/+)与Y基因 floxed杂合小鼠(Y基因lox/+,即CKO打靶Y基因),或Y基因 floxed纯合小鼠(Y基因lox/lox)交配,获得X基因Cre/+; Y基因lox/+ 后代杂合小鼠。第二...
要实现“条件型”敲除,还需Cre重组酶参与,通常是制作各种表达Cre重组酶的工具鼠,并将特定的Cre工具鼠与flox小鼠交配,获得同时携带loxP位点及Cre重组酶的双阳性小鼠,即条件型敲除模型。在表达Cre重组酶的区域,删除靶基因(flox基因)两个loxP位点之间的部分,实现条件型敲除。通过某特定基...
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