2神经系统研究:Cre小鼠:以Nestin(神经元特异性启动子)驱动Cre酶表达;Flox小鼠:携带与神经疾病相关的基因。可以研究目标基因对神经系统发育或疾病的影响。 3. 时间特异性基因敲除:Cre小鼠:携带诱导型Cre重组酶(如ER-Cre)基因,需激活剂(如他莫昔芬)诱导表达;Flox小鼠:携带...
Cre小鼠和Flox小鼠是科学研究中常用的两种转基因小鼠模型,主要用于研究基因在特定组织、细胞或时间点的功能。共同构建了Cre/loxP系统,为一种高效的基因编辑工具。 01 基本概念 2. Flox小鼠:携带目标基因两侧插入了loxP位点的转基因小鼠(Flox是“flanked by loxP”的缩写)。这些loxP位点为Cre酶的作用提供靶标。loxP位...
Cre-lox系统通常包括两种小鼠:一是Cre工具鼠,该小鼠中的Cre重组酶由特定启动子驱动,可在特定细胞或组织表达Cre重组酶;二是Flox小鼠,即在小鼠靶基因序列两侧带有Lox位点。将上述两种小鼠杂交繁育,子代中可以获得既带有Cre又带有Flox基因的小鼠,即基因条件性敲除或过表达小鼠。 2.1基因条件性表达 基因条件性表达所需要的...
条件性基因敲除小鼠(也叫flox小鼠)是指在目的基因中含有成对的loxp位点的小鼠,与特定的Cre工具鼠交配后可以实现基因的选择性敲除。Cre工具鼠由于Cre 重组酶上游启动子的表达谱区别,因此能够在特定的组织或细胞中表达Cre,和条件性基因敲除小鼠交配后就能够实现基因敲除空间的特异性。 有了空间上的特异性,有些老师又想...
3Cre-loxP 基因敲除小鼠的构建方法1.构建 Flox 小鼠：首先，将 LoxP 序列插入到需要删除 DNA 区域的两端，这一区域通常被称为 flox 区。获得的小鼠称为 Flox 小鼠，其基因功能在正常情况下保持不变。2. 选择 Cre 工具鼠：根据实验需求，选择具有组织或细胞特异性启动子的 Cre 工具鼠。这些小鼠能够在特定的组织...
Cre鼠常用于与Flox小鼠杂交进行条件性的目的基因敲除，但也有研究将Cre鼠用于切割位于报告基因前的终止序列，以达到荧光标记特定细胞的目的，进一步研究细胞命运。2. Flox鼠与Cre鼠的配繁 在实际应用中，通过不同的Flox鼠与Cre鼠的配繁可以实现多种研究目的，通过组织/细胞特异性Cre鼠敲除特定组织/细胞群体的特定基因...
Cre重组酶的重组效率并不是100%的,也就是说当Cre小鼠与flox小鼠交配后,特定组织中只有部分细胞中发生重组,因此会产生嵌合模式。 lox位点的放置位置会影响重组效率。只有两个lox位点相遇才能在Cre作用下发生位点特异性重组,而两个lox位点相距越远,它们相遇的概率就越低,导致重组效率也就越低。因此,在设计条件性基因...
Fig 3. Breeding and Genotyping Strategies for Conditional KO/KI Mice[2]. 使用Floxed品系与Cre小鼠配繁后,在进行常规的loxp位点插入鉴定(引物a,b)的基础上,补充进行Cre酶是否发挥作用的鉴定(引物c)是非常重要的。这里不仅要关注Cre酶是否发挥作用,同时也要关注Cre发挥作用后,Loxp位点是否仍然存在(一般我们进行基...
The results of PCR amplification and sequencing allow us to determine accurately the flox cre genotype of mice. 接下来,我们要用一些特定的引物和合成的克隆DNA来帮助我们对PCR扩增出来的DNA片段进行鉴定。通过这个方法,我们可以确定小鼠身上是否含有flox和cre基因的特定片段。我们还会用测序技术来核实鉴定出来的...
南模生物利用AAV介导的Cre-flox系统构建了丰富的动物模型,部分验证数据如下: 小鼠肺癌模型 由气管雾化注射AAV-Cre病毒至KL小鼠(NM-CKO-234719)肺部,使Cre在小鼠肺部特异性表达,诱导Stk11表达缺失与Kras-G12D突变,可诱发肺癌发生。 小鼠PKD运动障碍模型