首先需要说明的是,熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进行Co-IP结果图分析 的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下,弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤,结合图 中展示的结果进行分析,便可以看懂Co-IP的实验结果图。 Co-IP结 果分析案例一 该图为验证蛋白EDR1与蛋白EDR4之间是否存在相互作用的结果图。由图中可以...
CO-IP其实就是验证AB两个蛋白是否结合相互作用,做法就是制备AB两个目标蛋白都有的蛋白样品,然后用A蛋白或者B蛋白的抗体挂在磁珠上去拉这个蛋白样品,用拉下来的溶液(蛋白)去做wb,wb用的A蛋白抗体或者用B蛋白抗体都能杂到,就证明AB用结合,因为A抗体只能拉A蛋白,如果用B抗体杂到了,证明B和A结合在一起被拉下来...
去氧胆酸钠(离子去污剂,提取蛋白;用 H2O 配制成 10%储存液;避光保存) 注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。 RIPA 蛋白酶抑制剂 苯甲基磺酰氟(PMSF)(用异丙醇配制成 200mM 的储存液,室温保存) EDTA(钙螯合剂;用 H2O 配制成 100mM 的储存液,PH ...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
4、可与我司Co-IP实验进行衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。实验周期 5-10个工作日 样品接收标准 客户下单及项目信息填写 在我司官网http://plant.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、项目所需要的具体信息，价格由系统自动计算。实验信息 在实验开始、结题关键节点系统会自动...
Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。3、实验结果图解读 在了解实验流程的基础上，为了来帮助大家看懂实验结果图，我们通过案例展示形式...
控制对于了解您的实验是否有效并在事情没有完全解决时进行故障排除至关重要。 您可以为 Co-IP 使用多种不同的控件(图 2)。 图2:免疫共沉淀的示例对照 阴性对照 这些控件表明您在实验中看到的任何交互都是有效的。 使用涂有非特异性抗体的珠子,在您的裂解物中孵育并与您的样品一样处理。 最好从与实验中的抗...
1.Co-IP实验结果示例图 图3 Co-IP结果示例图(A代表protein A和B存在相互作用,B代表protein A和B之间不存在相互作用) *非实际条带,仅供参考 对结果进行分析之前,还需要了解图中注释的具体含义: 由上图中可以看到,蛋白A带有Flag标签,蛋白B带有Myc标签,该实验为利用标签蛋白来沉淀和检测目的蛋白;该Co-IP实验样本...