⾸先需要说明的是，熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进⾏Co-IP结果图分析 的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下，弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤，结合图 中展⽰的结果进⾏分析，便可以看懂Co-IP的实验结果图。Co-IP结果分析案例⼀ 该图为验证蛋⽩EDR1与蛋⽩EDR4之间是否...
注意：检测激酶（致活酶）实验时，不要加去氧胆酸钠，因为离子型去污剂能够使酶变性，导致活性丧失。RI...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了...
1、基本原理 免疫共沉淀技术是在免疫沉淀的基础上,通过选择一个靶蛋白的抗体,来共同沉淀与其相互作用的其他蛋白质。这使得研究者能够捕获并分析蛋白质复合物,揭示蛋白质间的直接或间接相互作用关系。 2、实验步骤 免疫共沉淀的实验步骤与免疫沉淀类似,但在选择抗体和处理样品方面有所不同。以下是免疫共沉淀技术的基本...
首先需要说明的是,熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进行Co-IP结果图分析的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下,弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤,结合图中展示的结果进行分析,便可以看懂Co-IP的实验结果图。 Co-IP结果分析案例一 该图为验证蛋白EDR1与蛋白EDR4之间是否存在相互作用的结果图。
操作步骤与结果分析 Co-IP 实验流程 图2. Co-IP 实验流程图[1][5]。 Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1] 01样本准备 采用适当的方法收集细胞,使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。 02固相介质准备 将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出,用平衡液清洗磁珠/琼脂糖...
利用内源性CO-IP实验为验证两个蛋白是否存在已知作用，如果最终的结果为阳性，则可以证明两个蛋白之间存在相互作用；但如果结果为阴性，无法证明两个蛋白之间不存在相互作用，也有可能是蛋白在细胞内表达量低等原因导致。因此在进行内源性CO-IP验证两个蛋白是否存在相互作用时，建议先做过表达CO-IP作为对照。Detaibio...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...