IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术，是一种基于质谱技术的分析方法，通过用特定抗体捕获目的蛋白，然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析，从而获得蛋白质的定量和定性信息。其原理是通过亲和纯化的方法，利用特异性抗体富集细胞内的靶蛋白，通过加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步...
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。, 视频播放量 116、弹幕量 0、点赞数
IP-MS原理主要包括以下几个步骤: 1. 表达载体构建:将目标基因与荧光标签(如GFP)融合,构建表达载体。将构建好的载体转化到植物材料中,使目标基因表达并产生荧光信号。 2. 植物材料处理:将转化后的植物材料进行适当处理,如切片、破碎等,使细胞内的目标蛋白暴露出来。 3. 蛋白提取:利用蛋白提取试剂盒从植物材料中...
IP用于从复杂的生物样本中分离和纯化特定蛋白质，依赖于抗体对目标蛋白的特异性识别并形成抗原-抗体复合物，然后通过物理方法（如离心或磁珠）将这些复合物沉淀下来，再结合Western blot（WB）或质谱（mass spectrum，MS）对目标蛋白进行检测分析，即可对目标蛋白进行定性/定量分析。接下来，我们从IP实验目的、IP实验原理...
通过一次IP-MS实验,能高通量的鉴定和筛选到多个与要研究的目的蛋白(target)存在相互作用的蛋白质(蛋白质复合物组分),从而拥有属于自己的专属蛋白质相互作用数据库,能够进行更深入的生物学功能和分子机制的研究。 实验步骤 用Lysis Buffer裂解细胞,可以适当加上超声辅助,或者在冰上放置30 min,每10 min吹吸一次细胞,...
1. IP-MS分析的原理 免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是将特异性抗体用于选择性地捕获目标蛋白质及其相互作用的蛋白质，随后利用质谱技术对这些蛋白质进行鉴定和定量分析的方法。在IP步骤中，我们使用抗体与目标蛋白质结合，从复杂的细胞提取物中高效地将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质捕获下来。然后，将这些蛋白质通过质谱...
IP-MS原理分为三个主要步骤:免疫沉淀、核心质谱分析和数据分析。 首先是免疫沉淀。实验开始时,科学家会使用抗体与感兴趣的蛋白结合。这些抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体,具体选择由实际需要决定。然后,这些抗体会与一些介质(如磁珠或琼脂糖)结合,以便后续的分离和富集。此时,生物样本中的目标蛋白也会结合在这些抗体...