由客户提供IP实验获得的beads样品→谱度众合以高分辨液质联用系统进行检测→基于质谱检测数据出具检测和分析报告,报告内容包括:IP-MS实验效果和数据质量评估结果、高可信度互作蛋白列表和可用于辅助筛选关键互作蛋白的注释富集分析、蛋白互作数据库挖掘、互作网络分析、筛选和互作网络构建、结合公开蛋白互作数据库挖掘信息筛选...
IP-MS即免疫沉淀-质谱联用技术，是一种基于质谱技术的分析方法，通过用特定抗体捕获目的蛋白，然后用质谱仪对免疫沉淀后的复合物进行高通量分析，从而获得蛋白质的定量和定性信息。其原理是通过亲和纯化的方法，利用特异性抗体富集细胞内的靶蛋白，通过加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步...
1、Lysis Buffer和Wash Buffer成分一样,各实验室略有差别,一般如下(仅供参考): 2、WB是靶向的检测并且经过了抗体的多级放大,理论上比质谱非靶向性的检测灵敏度要更高,所以需要做质谱的IP实验应该提高细胞量,高质量的IP-MS文章通常使用1e8(约10 cm dish x 10或15 cm dish x 5)的细胞起始用量。我们推荐野生...
IP-MS原理主要包括以下几个步骤: 1. 表达载体构建:将目标基因与荧光标签(如GFP)融合,构建表达载体。将构建好的载体转化到植物材料中,使目标基因表达并产生荧光信号。 2. 植物材料处理:将转化后的植物材料进行适当处理,如切片、破碎等,使细胞内的目标蛋白暴露出来。 3. 蛋白提取:利用蛋白提取试剂盒从植物材料中...
第一步,我们要准备好实验需要的东西,就像我们要做饭,得先把食材和锅碗瓢盆准备好一样。我们需要一些样品,这就是我们要研究的东西,比如说一块小小的金属片。还要有一些特殊的仪器,这些仪器就像是我们的小助手,能帮我们完成实验。 接下来,我们要把样品放到一个小小的容器里,这个容器就像一个小房子,要让样品在里面...
(2)IP-MS: 可以进一步定量分析蛋白的丰度和鉴定蛋白间的相互作用。 在定量分析中,关键指标包括Fold Change和Intensity。 Fold Change表示实验组与对照组间蛋白丰度的差异倍数。 Intensity则反映蛋白质的相对丰度。 根据实际情况设定合理的Fold Change阈值和P值,进而评估蛋白表达差异和统计学显著性。
1. IP-MS分析的原理 免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是将特异性抗体用于选择性地捕获目标蛋白质及其相互作用的蛋白质，随后利用质谱技术对这些蛋白质进行鉴定和定量分析的方法。在IP步骤中，我们使用抗体与目标蛋白质结合，从复杂的细胞提取物中高效地将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质捕获下来。然后，将这些蛋白质通过质谱...