这一步骤通常在旋转混合仪上进行,以确保充分混合和反应。 3.洗涤与分离 通过磁分离架将磁珠-抗原-抗体复合物与未结合的蛋白质分离。用洗涤缓冲液洗涤复合物,以去除非特异性结合的蛋白质和其他杂质。最后,用洗脱缓冲液洗脱下来蛋白即可。 4.检测分析 可以将磁珠-抗原-抗体复合物用于后续的分析,如Western blot或质谱...
大致实验流程：裂解细胞：获得总蛋白液细胞裂解液与抗体孵育：蛋白-抗体复合物磁珠与蛋白-抗体复合物孵育：蛋白-抗体-磁珠复合物洗涤：去掉非特异结合的蛋白洗脱：将蛋白-抗体复合物重磁珠上分离出来WB或质谱鉴定 三、实验注意事项 抗体选择：用于COIP实验的抗体必须是IP级别的抗体，所以选购抗体时一定要看清楚该抗体能否...
用磁力架收集磁珠。去除上清。 5. 将抗原样品/抗体混合物加入盛有磁珠的离心管中,保持混匀室温下孵育1 h。 6. 用磁力架收集磁珠,除去未结合的样品,保存以备分析。 7. 向离心管中加入500 µL 免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液,轻柔混匀。收集磁珠,弃上清。再重复洗两次。 8. 向管中加入 500 µL 超纯水,轻柔...
4. Co-IP样品制备:将目标蛋白与蛋白质复合物进行孵育,加入特异性抗体,并加入免疫磁珠进行分离。将分离得到的免疫复合物进行超声破碎或离心处理,得到目标蛋白与其他蛋白质的复合物。 5. 蛋白质检测:对得到的蛋白质复合物进行SDS-PAGE或Western Blot检测,观察目标蛋白与其他蛋白质的表达情况。 6. 数据分析:对实验结果...
收集蛋白样品 沉淀诱饵蛋白 SDS-PAGE及WB检测 实验对照设置 可能出现的“假阳性”需要设置的对照实验 磁珠与蛋白X非特异性结合 “磁珠+抗体X+抗体Y”磁珠与蛋白Y非特异性结合 “磁珠+蛋白Y”抗X抗体和Y非特异性结合 “磁珠+抗体X+蛋白Y”抗X抗体（或磁珠）会和细胞裂解液内其它蛋白结合 ...
通俗点来说，假设我们需要研究样品中A蛋白和B蛋白之间是否存在一些相互作用，首先我们通过合适的方法处理样本，将蛋白提取出来（同时不能破坏蛋白之间的相互作用），然后用预先结合了琼脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗体捕获样本中的A蛋白，那么与A蛋白结合的B蛋白也能一起沉淀下来。再将蛋白从珠子上裂解下来，对B蛋白进行检测...
1. 将 25 µL (0.25 mg) 的 Pierce 蛋白 A/G 的磁珠加入1.5 mL 离心管中。 2. 向磁珠中加入 175 µL 免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液,轻微涡旋混匀。 3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。 4. 向离心管中加入 1 mL 免疫沉淀裂解/漂洗缓冲液。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 mi...
收集蛋白样品 沉淀诱饵蛋白 SDS-PAGE及WB检测 实验对照设置 可能出现的“假阳性”需要设置的对照实验 磁珠与蛋白X非特异性结合 “磁珠+抗体X+抗体Y”磁珠与蛋白Y非特异性结合 “磁珠+蛋白Y”抗X抗体和Y非特异性结合 “磁珠+抗体X+蛋白Y”抗X抗体（或磁珠）会和细胞裂解液内其它蛋白结合 ...