Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer对细胞有一定的裂解能力,能获得较多的胞浆蛋白,而对细胞核的裂解能力有限,不能完全裂解细胞核,因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验;而WB Super RIPA Lysis Buffer对动物组织和细胞的裂解能力极强,它可以完全裂解细胞核和线粒体,并可提取到更多的膜蛋白,从而可获得更多的总蛋白。因...
常规IP裂解是可以超声、涡旋的。Co-IP为尽量减少对蛋白互作的破坏，尽量不超声，可用移液器吹打混匀(短...
泳道1：转染Flag空载体的HEK-293T细胞裂解液泳道2：转染Flag-诱饵蛋白的HEK-293T细胞裂解液泳道3：转染Flag空载体的HEK-293T细胞裂解液采用20 μL ChainFreeTM Anti-Flag 磁珠IP后的洗脱液泳道4：转染Flag-诱饵蛋白的HEK-293T细胞裂解液采用20 μL ChainFreeTM Anti-Flag 磁珠IP后的洗脱液一抗：Anti-Flag小鼠...
Co-IP原理当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,假如细胞内存在XY蛋白复合物,用X(X也称为诱饵蛋白)的抗体免疫沉淀X蛋白,那么与X在体内结合的蛋白质Y(Y 也称为靶蛋白)也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中加入X的抗体沉淀蛋白X,随后利用蛋白印迹(western blot,WB)...
因此,Co-IP裂解液是进行Co-IP实验和磷酸化抗体检测等研究的理想选择。 二、使用注意事项 在使用Co-IP裂解液时,需要注意以下几点: 1. 裂解液的使用量应根据实验的具体需求进行调整,以确保充分裂解细胞并提取目标蛋白质。 2. 裂解液的使用条件,如温度、时...
RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)100mL 说明书1份 保存:RT,有效期2年。 使用方法: 制备Co-IP/IP蛋白样品 1.对于培养细胞样品(0.5～10×106个): a.蛋白提取 ■ 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向Co-IP/IP RIPA裂解液中,加入蛋白酶抑制剂混合物A (货号:MT0069),使其最终浓度为1×。如250μL Co-IP/...
样本一般源于非变性裂解细胞,活细胞状态下蛋白质之间的相互作用被保持,所以其反映的是细胞中真实的蛋白互作情况; 对于有高质量IP抗体的诱饵蛋白来说,该技术方法经典,操作简单,成本较低; 适用范围广,可用于各种细胞和组织类型。 缺点 依赖高质量抗体,抗体的选择很大程度上决定了实验的成败; ...
1.提供最 裂解液, 限度保留蛋白质天然构象。 2.提供 填料,确保 程度结合蛋白。 服务内容 服务项目 客户提供服务内容服务周期交付内容 免疫沉淀IP服务 细胞或组织 目的蛋白信息 目的蛋白抗体 细胞或组织裂解 裂解液预清除 蛋白及抗体反应 复合物及珠子交联 ...
免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)的原理和IP是一样的,当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,假如细胞内存在 XY 蛋白复合物,用 X(X也称为诱饵蛋白)的抗体免疫沉淀 X,那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y(Y也称为靶蛋白)也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中...
·更换细胞培养基为3mL转染培养基,并将转染混合物均匀滴入细胞中。 培养基更换(Day 1) ·转染24小时后,用含CaCl2和MgCl2的PBS洗涤细胞去除未转染的DNA,再添加新鲜培养基。 收获细胞及梯度分离IP(Day 2) ·使用NMPH裂解液(分离核糖体并释放新生链),并通过超速离心分离上清液。