步骤 一、细胞的铺板与转染 1、提前一晚将 293T 细胞铺板至 6 cm 皿中,铺板量以达到相应的转染试剂要求为准; 2、用各实验室相应的转染试剂将以下质粒组合转染 2 皿细胞:flag 空载+HA-B;flag-A+HA-B;每质粒 2 微克。 二、免疫沉淀 1、转染 24 小...
Co-IP是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用的方法，细胞膜蛋白Co-IP可用于验证细胞膜蛋白之间或者膜蛋白与其他蛋白的相互作用。在膜蛋白Co-IP实验过程中，首先需要根据细胞膜提取原理从细胞裂解液中提取细胞膜，细胞膜提取的原理为：将细胞暴露于阳离子硅胶珠（直径20-50nm），带正电荷的硅胶...
Co-IP实验通常有两种,一种为内源性蛋白相互作用验证,另外一种为非内源性蛋白相互作用验证,内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生,即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达,表达完成后收集细胞进行裂解得到蛋白样...
Co-IP是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用的方法,细胞膜蛋白Co-IP可用于验证细胞膜蛋白之间或者膜蛋白与其他蛋白的相互作用。 在膜蛋白Co-IP实验过程中,首先需要根据细胞膜提取原理从细胞裂解液中提取细胞膜,细胞膜提取的原理为:将细胞暴露于阳离子硅胶珠(直径20-50nm),带正电荷的硅胶珠包...
免疫共沉淀结果表明在正常人甲状腺上皮细胞系中,CXCR3与Beclin1存在相互作用。 案例解读2 ①分子量大小 ②不同的细胞系名称 ③内参蛋白:验证实验条件、排除非特异性结合,并作为实验重复性和准确性的内部对照 ④WCL:全细胞裂解液 ⑤实验组免疫共沉淀的蛋白样品 ...
Co-IP原理当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,假如细胞内存在XY蛋白复合物,用X(X也称为诱饵蛋白)的抗体免疫沉淀X蛋白,那么与X在体内结合的蛋白质Y(Y 也称为靶蛋白)也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中加入X的抗体沉淀蛋白X,随后利用蛋白印迹(western blot,WB)...
免疫共沉淀（Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，...
CO-IP免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）是一种常用的生物化学技术，用于研究蛋白质间相互作用和蛋白质复合体的组成。通过该技术，我们可以了解蛋白质在细胞内的相互作用关系，揭示细胞信号传导、代谢调控等重要生物过程的机制。二、CO-IP免疫共沉淀的原理 CO-IP免疫共沉淀的原理基于抗体的特异性结合。首先，我们需要...
Co-IP是研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法，由于是在非变性条件下研究的，因此可以反映蛋白质在细胞内互作的真实状态。适用于研究两个已知蛋白之间的相互作用关系，也可以提供已知蛋白去寻找与之相互作用的未知蛋白。实验原理 在非变性条件下裂解细胞，以保留活细胞中许多蛋白-蛋白相互作用的复合物。若要研究细胞...
以下是冻存后进行 Co-IP 的一般步骤：样品解冻：将冻存的细胞样品从 -80°C 取出，置于冰上解冻。