Co-IP裂解液是一种非常温和的裂解液,主要用于免疫共沉淀实验。相比于其他裂解液,Co-IP裂解液不仅能够保持目标蛋白质的天然活性,还能保持与目标蛋白相关联的蛋白质连接不受影响。同时,对于大多数酶切类实验所用酶的活力也无干扰。因此,Co-IP裂解液是进行Co-I...
IP-MS的原理是将细胞裂解液或组织提取液等蛋白混合体系与结合有目的蛋白特异性抗体或标签抗体的磁珠进行孵化，促进结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物的形成。混合体系中能与目的蛋白相互作用的蛋白质通过特异性结合而与其他蛋白组分分离开来，通过蛋白纯化，获得与目的蛋白质相互作用的靶蛋白。最后通...
为了帮助大家更好的理解实验结果图，小远在这里对Co-IP实验结果图中常出现的一些名词进行一个解释。Input：假设要验证蛋白A和蛋白B相互作用，那么前提是我们提供的细胞裂解液里要有蛋白B和蛋白A，如果没有，那这个实验就没有意义了。那怎么证明细胞裂解液里有蛋白A和B呢？很简单，直接取细胞裂解液做蛋白A和蛋白B...
Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1]1样本准备采用适当的方法收集细胞，使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。2固相介质准备将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出，用平衡液清洗磁珠/琼脂糖凝胶。3预清洗 (可选)将细胞裂解液或已预处理的样本用蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/...
1、样品裂解-裂解液; 2、样品的预纯化-normal IgG/微珠; 3、与目标蛋白抗体共孵育-IP抗体、Normal IgG; 4、免疫共沉淀-微珠; 5、微珠清洗-裂解液; 6、洗脱; 7、WB 分析或其他分析-WB一抗、二抗。 1、样品裂解-温和裂解 温和的裂解液进行裂解,常用的去垢剂成分:NP-40、TritonX-100、IGEPAL CA-630、...
1、样品裂解-温和裂解 温和的裂解液进行裂解，常用的去垢剂成分：NP-40、TritonX-100、IGEPAL CA-630...
除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体Y）对细胞裂解液进行WB检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X(抗体Y)。在某些CO-IP实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行蛋白X和蛋白Y的WB检测，该对照组称为output组。免疫共沉淀的实验流程 免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—...
IP-MS的原理是将细胞裂解液或组织提取液等蛋白混合体系与结合有目的蛋白特异性抗体或标签抗体的磁珠进行孵化,促进“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物的形成。 混合体系中能与目的蛋白相互作用的蛋白质通过特异性结合而与其他蛋白组分分离开来,通过蛋白纯化,获得与目的蛋白质相互作用的靶蛋白。
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① 图1中的Input组是对细胞裂解液的蛋白样本进行WB检测，采用标签蛋白Flag和Myc的抗体去验证蛋白样本中是否存在目的蛋白。图1 A和B的Input结果均表示存在两种目的蛋白。② IP组是用含Flag抗体的磁珠进行免疫沉淀，将得到的沉淀复合物进行WB检测，判断protein A和protein B是否存在相互作用。图1A的IP组结果显示...