⾸先需要说明的是，熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及实验的操作流程是进⾏Co-IP结果图分析 的前提。在清楚知道Co-IP操作流程的前提下，弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤，结合图 中展⽰的结果进⾏分析，便可以看懂Co-IP的实验结果图。Co-IP结果分析案例⼀ 该图为验证蛋⽩EDR1与蛋⽩EDR4之间是否...
5、 每1 ml 总蛋白中加入100 μl Protein A琼脂糖珠(50%),4℃摇晃1 h以去除非特异性杂蛋白,降低背景。 6、4℃,14000g离心15min,将上清转移到一个新的离心管中标号Input,留Protein A珠子,标号IP。 7、变性以及还原蛋白 室温溶解蛋白上样缓冲液(5×),按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合,IP组...
🛠 实验步骤: 用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。 用PBS配制50%的Protein A/G-agarose工作液。 加入Protein A/G agarose工作液,4℃摇动10分钟去除非特异性蛋白。 4℃,14000g离心15分钟,去除Protein A/G-agarose微球。 使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。 加入一抗,4℃过夜。 14000g离心收集沉淀,用预冷洗涤缓冲...
去氧胆酸钠(离子去污剂,提取蛋白;用 H2O 配制成 10%储存液;避光保存) 注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。 RIPA 蛋白酶抑制剂 苯甲基磺酰氟(PMSF)(用异丙醇配制成 200mM 的储存液,室温保存) EDTA(钙螯合剂;用 H2O 配制成 100mM 的储存液,PH ...
细胞免疫共沉淀实验(Co-IP)是一种研究细胞内蛋白质相互作用的重要方法。其基本原理是,如果细胞内两种蛋白质(A和B)有直接或间接的相互作用,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入A蛋白的抗体,可以将A蛋白沉淀下来,与其直接或间接相互作用的B蛋白或C蛋白也会一起被沉淀下来。通过Western blot检测沉淀中是否存在...
Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。3、实验结果图解读 在了解实验流程的基础上，为了来帮助大家看懂实验结果图，我们通过案例展示形式...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
📝 注意事项:此步骤获得的细胞溶解物可置于-80℃下长期保存。在稀释液中可加入1 mM PMSF和蛋白酶抑制剂。0 0 发表评论 发表 作者最近动态 阿鹿的Jessica 2025-01-13 传统文化进校园:传承与丰富校园文化📚 ...全文 +2 阿鹿的Jessica 2025-01-13 💼医生IP变现的10大秘诀💼🌐在互联网...全文 +1 ...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是一种经典的蛋白质相互作用研究方法,基于抗体与抗原的特异性结合。它通过在非变性条件下裂解细胞,保留细胞内蛋白质间的相互作用,从而确定两种蛋白质是否在体内结合。以下是详细的实验步骤和注意事项: 实验材料准备 抗体:用于免疫沉淀目标蛋白质的抗体。
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是研究蛋白质相互作用的有效方法。它基于抗体和抗原之间的专一性作用，能保留细胞内蛋白质间的天然相互作用。通过用蛋白质X的抗体沉淀X，能同时沉淀与其结合的蛋白质Y，用于检测两种蛋白质的体内结合。二、准备工作 准备预冷的...