方案三:标签类(Flag,HA,GFP,myc等)IP通过过表达方式,将目标IP蛋白带上Flag,HA,GFP,myc等标签,可极大方便后续的实验检测。 ①可直接选择现成的Flag beads或者磁珠,IP实验会比较容易操作,由于标签抗体非常成熟,IP抗体与WB抗体选择不同种属来源,即可避免轻重链问题。 ②WB选择直接HRP标记的标签抗体(如Flag-HRP mab)...
5、 每1 ml 总蛋白中加入100 μl Protein A琼脂糖珠(50%),4℃摇晃1 h以去除非特异性杂蛋白,降低背景。 6、4℃,14000g离心15min,将上清转移到一个新的离心管中标号Input,留Protein A珠子,标号IP。 7、变性以及还原蛋白 室温溶解蛋白上样缓冲液(5×),按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合,IP组...
🛠 实验步骤: 用RIPA裂解缓冲液裂解细胞。 用PBS配制50%的Protein A/G-agarose工作液。 加入Protein A/G agarose工作液,4℃摇动10分钟去除非特异性蛋白。 4℃,14000g离心15分钟,去除Protein A/G-agarose微球。 使用BCA法或其他方法测定总蛋白浓度。 加入一抗,4℃过夜。 14000g离心收集沉淀,用预冷洗涤缓冲...
2 操作步骤与结果分析Co-IP 实验流程图 2. Co-IP 实验流程图[1][5]。Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1]1样本准备采用适当的方法收集细胞，使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。2固相介质准备将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出，用平衡液清洗磁珠/琼脂糖凝胶。3...
Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。3、实验结果图解读 在了解实验流程的基础上，为了来帮助大家看懂实验结果图，我们通过案例展示形式...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是研究蛋白质相互作用的有效方法。它基于抗体和抗原之间的专一性作用，能保留细胞内蛋白质间的天然相互作用。通过用蛋白质X的抗体沉淀X，能同时沉淀与其结合的蛋白质Y，用于检测两种蛋白质的体内结合。二、准备工作 准备预冷的...
控制对于了解您的实验是否有效并在事情没有完全解决时进行故障排除至关重要。 您可以为 Co-IP 使用多种不同的控件(图 2)。 图2:免疫共沉淀的示例对照 阴性对照 这些控件表明您在实验中看到的任何交互都是有效的。 使用涂有非特异性抗体的珠子,在您的裂解物中孵育并与您的样品一样处理。 最好从与实验中的抗...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...