方案三:标签类(Flag,HA,GFP,myc等)IP通过过表达方式,将目标IP蛋白带上Flag,HA,GFP,myc等标签,可极大方便后续的实验检测。 ①可直接选择现成的Flag beads或者磁珠,IP实验会比较容易操作,由于标签抗体非常成熟,IP抗体与WB抗体选择不同种属来源,即可避免轻重链问题。 ②WB选择直接HRP标记的标签抗体(如Flag-
注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。 RIPA蛋白酶抑制剂:苯甲基磺酰氟(PMSF,用异丙醇配制成200mM的储存液,室温保存)、EDTA(钙螯合剂,用H2O配制成100mM的储存液,PH 7.4)、亮抑酶肽(Leupeptin,用H2O配制成1mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)、抑蛋白酶...
如果您的蛋白质在总裂解物中,但不在 IP 中,则需要对每个步骤进行故障排除以确保 IP 正常工作。纯化的重组蛋白可用于确保您的检测方法有效——这可能适用于被拉下的蛋白质或潜在的相互作用蛋白质。 coip免疫共沉淀实验的更多提示 当然,在这些步骤中,有很多变数可以让你的Co-IP成功,或者最后让你一脸悲伤。 并且有...
1.一次完整严谨的CoIP实验，应当包含IgG对照组、IP实验组以及Input组；2. Input泳道所点样本与IP前WB一致，作为阳性对照；3. 判定CoIP实验成功的标准，是能够在IP泳道检测到诱饵蛋白信号，且IgG泳道检测不到；如果IgG泳道也检测到诱饵蛋白，说明该蛋白能够与所有IgG类的抗体结合，只能换别的实验如酵母杂交、GST pull...
因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
4、可与我司Co-IP实验进行衔接，整个实验可以畅通且快速地完成。实验周期 5-10个工作日 样品接收标准 客户下单及项目信息填写 在我司官网http://plant.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、项目所需要的具体信息，价格由系统自动计算。实验信息 在实验开始、结题关键节点系统会自动...
Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。3、实验结果图解读 在了解实验流程的基础上，为了来帮助大家看懂实验结果图，我们通过案例展示形式...
2 操作步骤与结果分析Co-IP 实验流程图 2. Co-IP 实验流程图[1][5]。Co-IP 流程 (以内源性 Co-IP 为例)[1]1样本准备采用适当的方法收集细胞，使用含有合适的蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液裂解细胞。2固相介质准备将含有保护液的蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖混匀取出，用平衡液清洗磁珠/琼脂糖凝胶。3...
1.Co-IP实验结果示例图 图3 Co-IP结果示例图(A代表protein A和B存在相互作用,B代表protein A和B之间不存在相互作用) *非实际条带,仅供参考 对结果进行分析之前,还需要了解图中注释的具体含义: 由上图中可以看到,蛋白A带有Flag标签,蛋白B带有Myc标签,该实验为利用标签蛋白来沉淀和检测目的蛋白;该Co-IP实验样本...