特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，然后利用能够与抗体结合的珠状支持物（例如Nanoab-Agarose）来固定和沉淀复合物，同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来，最后洗去与靶蛋白相结合的非特异性蛋白，再通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测得到我们要验证的结果。因此，Co-IP的实验步骤可大...
基本情况得到之后，开始进行分析：观察图片的顺序为Co-IP实验操作顺序相同。首先观察Input组，即阳性对照组。第一块胶图为利用anti-FLAG沉淀FLAG标签，发现两个条带都在130KD处有蛋白，说明两组实验都存在B-FLAG蛋白且其大小为130KD，第二块胶图为利用anti-GFP标签沉淀GFP标签，发现第一条带在25KD存在蛋白而第二...
通过使用不同的诱饵蛋白系统地进行Co-IP实验,可以建立一个全面的蛋白质相互作用网络,来揭示细胞信号通路、蛋白质复合物和调控网络[4] 3.蛋白质相互作用的验证 通过免疫沉淀靶蛋白确认其与特定结合伴侣的相互作用,验证从其他蛋白质相互作用筛选技术(例如酵母双杂交测定或蛋白质微阵列)获得的结果 4.研究动态蛋白质相互...
Co-IP 是通过免疫沉淀获得已知的蛋白及其互相作用的蛋白,以确定这两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的方法。 (Co-IP流程,图片来自网络) 有了上面的铺垫,更方便推出今天的主角,Co-IP。 设想一下。 例如,我们要研究蛋白X和蛋白Y之间是否存在相互作用,可以使用蛋白X...
|Co-IP结果分析案例三 该图为验证蛋白X与蛋白Y是是否存在相互作用的结果图。由图可以发现,该实验被分为两组:input组及IP组,有两块胶图,第一块是IB验证蛋白X的存在,第二块是IB验证蛋白Y的存在。由对照组的条带可以得到结论:蛋白X与蛋白Y都是存在的。IP组的第一个条带表示利用IgG进行沉淀实验,结果蛋白X与...
通过使用不同的诱饵蛋白系统地进行Co-IP实验,可以建立一个全面的蛋白质相互作用网络,来揭示细胞信号通路、蛋白质复合物和调控网络[4] 3.蛋白质相互作用的验证 通过免疫沉淀靶蛋白确认其与特定结合伴侣的相互作用,验证从其他蛋白质相互作用筛选技术(例如酵母双杂交测定或蛋白质微阵列)获得的结果 ...
IP:指的是磁珠上挂的抗体。 IB:指的是 WB 用的抗体。 IgG:这个是阴性对照,磁珠里加的 IgG 不会拉到任何蛋白,所以是阴性对照。 案例分析 📈举个例子吧,有个实验是验证蛋白 EDR1 和蛋白 EDR4 之间是否存在相互作用。实验中,EDR4 带有 GDP 标签,EDR1 带有 FLAG 标签。实验分为两组:第一组有 GFP 标签...
1.Co-IP的定义&用途 2.Co-IP解读案例1 3.Co-IP解读案例2 4.Co-IP解读案例3 01 Co-IP的定义&用途 定义 免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
Co-IP证明PKM2和USP20互作(So-Ra Kim et al. 2015. Int J Oncol) 三个或三个以上蛋白之间的co-IP,实验设计也是参考双质粒共转染的Co-IP。只是需要构建三个不同标签的真核表达质粒,然后设置单质粒转染、两个质粒共转染和三个质粒共转染。 没有完全理解的可以先收藏,等需要做co-IP实验的时候,再拿出来参考...
图1文献中常见的Co-IP实验结果图 该图为验证蛋白A与蛋白B之间是否存在相互作用的结果图。由图中可以得到,蛋白A带有GFP标签,蛋白B带有FLAG标签,该实验为利用蛋白标签来沉淀和检测蛋白;该Co-IP实验实验被分为两组,第一组存在GFP蛋白和B-FLAG蛋白,第二组存在A-GFP蛋白和B-FLAG蛋白;图中共有三组胶图,分别是Inpu...