染色质免疫沉淀后测序(ChIP seq)是一种针对DNA结合蛋白、组蛋白修饰或核小体的全基因组分析技术。由于二代测序技术的巨大进步,ChIP-seq比其最初版本ChIP-chip具有更高的分辨率、更低的噪声和更大的覆盖范围。随着测序成本的降低,ChIP- seq已成为研究基因调控和表观遗传机制不可或缺的工具。 原理:甲醛处理细胞使目...
ChIP-seq流程图1. DNA与蛋白质交联:细胞通透性增强,甲醛溶剂使目的蛋白与DNA交联。细胞裂解提取核DNA; 2. 染色体片段化处理:使用超声破碎或者微球菌核酸酶进行消化,取部分破碎产物解交联,凝胶电泳检测总DNA…
1. ChIP-seqChIP-seq是结合染色质免疫沉淀和高通量测序的技术，用于检测特定DNA关联蛋白的位置。它通过抗体筛选目标蛋白与DNA的结合位点，涉及组蛋白修饰和转录因子调控。1.1 组蛋白修饰：组蛋白的N端尾部修饰（如甲基化、磷酸化、乙酰化等）影响染色质构型，从而影响基因表达。例如，H3K4me1与增强子区相...
ChIP-seq 是一种研究蛋白质与DNA相互作用的技术，其流程涉及多个步骤:交联与提取: 使用甲醛增强细胞通透性，目标蛋白与DNA交联，随后裂解并提取核DNA。片段化与免疫沉淀: DNA通过超声或酶消化片段化，实验组与抗体结合形成复合物，对照组则直接解交联。沉淀后，通过蛋白酶和盐处理去除非特异性片段。测序与...
生信基础：ChIP-seq流程与结果解读ChIP-seq实验流程主要包括以下步骤:1. DNA与蛋白质交联: 通过细胞渗透性增强和甲醛处理，目标蛋白与DNA发生交联，随后进行细胞裂解和核DNA提取。2. 染色体片段化: 通过超声破碎或核酸酶消化，将染色体片段化。实验组使用超声产物与抗体-磁珠结合，对照组则直接解交联DNA。3...
结果解读位于每一小节末尾 1. 工作流程 染色体免疫共沉淀(ChIP)是一种用于研究蛋白质与 DNA 的体内相互作用的经典实验技术。采用特异性抗体将目的蛋白进行免疫沉淀,由此可以把目的蛋白所结合的基因组 DNA 片段也富集下来。通过与高通量测序技术的结合,对 ChIP 后的DNA 产物进行测序分析, 从全基因组范围内寻找目的蛋...
新手,刚做完一个ChIP-Seq项目的分析,来记录一下,会分好几篇。 首先是下机数据fastqc之后会生成一个html格式的报告,根据报告可以看出自己数据的特点,便于之后clean的参数设置。以下是fastqc(v0.11.5)报告的内容说明(以自己的数据为例,经公司粗过滤后的下机数据)有网上搜索到的也有自己的体会: ...
"chip.align_only": false, "chip.true_rep_only": false, "chip.genome_tsv":"~/softwares/chip-seq-pipeline2/db/hg19.tsv", "chip.paired_end": true, "chip.ctl_paired_end": true, "chip.fastqs_rep1_R1": ["~/project2/analysis/ChIP-seq/encode-pipeline/encc/fastq/ENCC-K27-2_1.fas...
ChIP-seq可以用来鉴定蛋白质和DNA的相互作用区域,也可以用来比较不同生物学状态的差异。 有多种工具可以用来对ChIP-seq进行差异分析(DCS),虽然这些工具有的是专门针对ChIP-seq开发的,但是仍有些软件是基于RNA-seq的模型。 在不同的生物学场景中,应用不同的差异分析方法可能对结果产生很大的影响,对下游的分析和应用...