ChIP-Seq/q..ChIP-Seq是一种检测细胞内蛋白/DNA互作组的高通量技术。该技术通过联合免疫共沉淀技术和DNA测序技术,对目的蛋白在特定细胞/组织内的互作蛋白/DNA,进行系统的检测和分析。该技术适用于目的蛋白
ChIP-qPCR的富集实验与ChIP-seq实验一致。 1、首先是利用1%的甲醛对样本进行交联,以固定蛋白-DNA的结合状态; 2、随后对染色质进行提取和片段化(超声打断或酶切),此时取出一部分染色质(一般是2%Input),对DNA进行纯化,即为Input; 3、对部分染色质进行目标蛋白抗体的孵育与磁珠富集,解交联后纯化DNA,即为IP;同时,...
DNA-蛋白复合物去交联后，既可进行qPCR检测已知的DNA片段，也可通过二代测序的方法对与目的蛋白结合的DNA片段进行测序。当没有合适的目的蛋白（X）抗体时，可以通过表达融合了标签的目的蛋白，例如Flag，利用Flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-X，经裂解后与anti-Flag Beads孵育，目的蛋白与Flag融合的蛋白与Beads...
ChIP-Seq互作组验证，即在互作组分析筛选的基础上，进一步利用ChIP-qPCR技术对感兴趣分子进行靶向检测，更加精细，也是互作组验证的必由之路。成功验证上岸的基础是理想的互作组数据库和丰富的分析经验，方能事半功倍。广州基云生物，在IP互作组检测和关键机制分子筛选验证领域，具有丰富的经验，助力互作机制研究。如有...
辉骏生物使用ChIP-qPCR、ChIP-seq等技术在染色质免疫共沉淀ChIP研究实验技术服务超10年,公司在DNA与蛋白相互作用研究方面经验丰富,自有实验场地,ChIP外包代作服务价格优惠,实验数据已协助发表上千位客户发表高分论文
染色质免疫沉淀技术(ChIP)是在全基因组水平研究生命体组织或细胞内蛋白质与DNA相互作用的一种技术方法。CHIP又分为CHIP-qPCR(已知蛋白和靶序列)和CHIP-seq(已知蛋白和未知序列)。CHIP应用于检测与蛋白结合的DNA序列,常用于研究转录因子或组蛋白修饰。并且CHIP与其他方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP与基因芯片相结合...
技术方法:ChIP-seq、RNA-seq、RT-qPCR等 作者通过对小鼠体细胞重编程过程中进行转录组和ChIP-seq等测序分析,揭示了H3K27me3去甲基化酶JMJD3与KLF4在体细胞重编程中协同调控转录新机制。首先,JMJD3对重编程有2方面相反的作用;在机制上,JMJD3被KLF4特异性地招募至上皮和多能性基因位点,并辅助KLF4激活这些基因。进...
技术方法:ChIP-seq、RNA-seq、RT-qPCR等 作者通过对小鼠体细胞重编程过程中进行转录组和ChIP-seq等测序分析,揭示了H3K27me3去甲基化酶JMJD3与KLF4在体细胞重编程中协同调控转录新机制。首先,JMJD3对重编程有2方面相反的作用;在机制上,JMJD3被KLF4特异性地招募...
ChIP-seq的后期试验包括简单验证、转录因子或组蛋白修饰添加基因的干扰实验(非靶向),验证是否影响目标基因表达和细胞功能、靶向目标区域的TF结合/组蛋白修饰干扰实验,检测其影响下游靶基因的表达等
ChIP-qPCR和普通逆转录-qPCR的引物设计有很大不同。 普通逆转录 qPCR引物设计里一个很重要的原则是引物序列要跨内含子,目的就是把cDNA模板和genomic DNA模板区分开来,避免引物结合到残留的genomic DNA模板上,导致假阳性非特异性扩增信号。 而在ChIP-qPCR的引物设计中,则不需要这样,如果这样做,对有些组蛋白修饰的位...