一、chip-seq的原理: (1)ChIP-Seq(染色质免疫沉淀测序)是一种用于研究蛋白质与染色质相互作用的高通量测序技术;可视作染色体免疫共沉淀技术与二代测序技术的结合;ChIP可用于检测某种特异蛋白或某种特异蛋白修饰在某个基因组区域的相对丰度,可用来回答涉及蛋白质和染色质相互作用的问题; (2)ChIP用来确定蛋白质与DNA...
ChIP-Seq实验原理:示意图为Fig.1和Fig.2.在生理状态下,把细胞内的DNA与蛋白质交联(Crosslink)后裂解细胞,分离染色体,通过超声或酶处理将染色质随机切割,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,再通过反交联(Reverse crosslink)释放结合蛋白的DNA片段,最后测序获得DNA片段的序列。 注意:...
chipseq原理及流程 ChIP-seq 流程包括样品处理、染色质免疫沉淀、DNA提取和准备、测序和数据分析阶段。 首先,样品处理包括准备细胞、核和染色质。通过细胞生长、核提取和染色质交联等步骤,得到可以进行后续实验的样品。 接下来,进行染色质免疫沉淀。这一步骤使用抗体特异性地选择性地沉淀与特定转录因子或组蛋白修饰结合...
ChIP-seq的原理+流程: 1、Crosslinking:使用甲醛将目标蛋白与染色质交联固定起来(细胞具有通透性,生理状态下,转录因子和DNA的结合不稳定,所以需要用甲醛处理稳定结合,防止在后续打断DNA时lose binding。如果是研究核小体的位置和组蛋白修饰的位置,Histone的结合本身很稳定,可以免去Crosslinking这一步); 2、细胞裂解提取...
ChIP-Seq实验原理: ChIP-Seq(染色质免疫共沉淀测序)是一种研究体内蛋白质与DNA相互作用的技术。该技术结合了染色质免疫共沉淀(ChIP)和第二代测序技术,以在全基因组范围内检测与特定蛋白质(如转录因子、组蛋白等)相互作用的DNA区段。 实验步骤主要包括: 1.交联:在生理状态下,将细胞内的DNA与蛋白质进行交联,以固...
ChIP-seq服务流程 客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞培养——1%甲醛交联蛋白-DNA复合物——超声打断蛋白-DNA复合物——抗体沉淀蛋白-DNA复合物——解交联并纯化DNA片段——文库构建——Hiseq上机测序、数据质控 其中文库构建流程：（1）DNA片段末端修复；（2）3’端加A碱基；（3）连接测序接头；（4）PCR...
本文将从样品准备、免疫沉淀、DNA测序及数据分析等方面,详细介绍Chip-seq测序的原理与步骤。 一、样品准备: Chip-seq实验主要需要蛋白质与DNA相互作用的样品。常见的样品来源包括细菌、植物、动物等生物系统的细胞提取物、组织提取物以及血液等。在样品准备过程中,需要对DNA进行交联以固定蛋白质与DNA结合的状态,并通过...
一、ChIP实验原理 在活细胞状态下获得自然状态下蛋白质、DNA结合复合物,通过试剂交联固定蛋白DNA复合物,破碎细胞后获得细胞核DNA片段,利用超声波方法将核DNA随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法磁珠吸附沉淀染色质片段,特异性的富集蛋白结合的DNA片段,通过系列方法洗脱得到DNA片段并纯化与检测,从而...