ChIP-qPCR是一种研究细胞内蛋白与DNA相互作用的检测技术。它结合了免疫共沉淀和qPCR方法，旨在揭示目的蛋白在特定细胞或组织中与DNA的结合情况。通过此技术，科学家可以验证蛋白与DNA的相互作用，并应用于研究特定细胞或组织中蛋白-DNA互作的验证，以及不同遗传背景或实验条件下互作的差异。ChIP-qPCR在研究细...
一些非常稳定的相互作用则不需要交联。ChIP 与其它方法结合,扩大了其应用范围。与实时荧光定量 PCR 结合的 ChIP-qPCR,常用于检测蛋白质与特定位点的 DNA 是否有结合及结合的强度;与基因芯片结合的 ChIP-on-chip,广泛应用于特定靶标的高通量筛选;与高通量测序结合的 ChIP-seq,越来越多地被用于分析目标蛋白的全...
本期将重点介绍蛋白质与DNA相互作用的研究方法,染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是目前唯一研究二者互作关系的技术。ChIP可以完整真实地反映细胞中特定蛋白与DNA的结合关系,将蛋白-DNA复合物分离出来进一步研究特定的结合蛋白或与其结合的DNA,结合qPCR(ChIP-qPCR)可实现定量分析,结合二代测序(ChIP-...
Chip-qPCR原理是利用抗体专一性的特征,首先利用靶向目标蛋白的抗体,下拉目标蛋白结合的DNA片段,然后对蛋白和与之结合的DNA片段进一步进行分离,从而得到与蛋白相互作用的DNA片段。进而对这些下拉片段进行DNA高通量测序或进行实时定量荧光PCR,从而确定目的蛋白在基因组中的结合位点。
ChIP实验特别适用于研究转录因子（transcription factor, TF）与启动子（promoter）之间的相互作用，其优势在于能够在活细胞状态下真实反映TF与Promoter的结合情况。与体外研究相比，ChIP实验能更准确地模拟体内环境，减少误差。当使用甲醛固定活细胞时，蛋白与蛋白、蛋白与核酸之间会形成共价键，使得在活细胞内结合...
ChIP技术作为研究蛋白-DNA相互作用的主流手段，其后继步骤中，验证目标基因的结合状态是关键环节。ChIP-qPCR因其体内富集特性，被广泛用于验证。主要采用的定量方法是“双△CT法”，相较于“双标准曲线法”，它在实验设计和数据解读上更具准确性。双△CT法的核心是利用Input作为对照，通过计算IP（富集产物...
染色质免疫共沉淀（ChIP）是研究蛋白质与DNA相互作用的经典方法。ChIP-qPCR定量分析方法通过标准化ChIP的可变性来源，如染色质数量、免疫沉淀效率和DNA回收率，确保数据的可靠性和准确性。本文将详细介绍两种常用的ChIP-qPCR数据标准化方法——百分比输入法和富集倍数法。百分比输入法是通过将ChIP信号与输入...
ChIP-qPCR实验是一种结合染色质免疫沉淀(ChIP)与实时荧光定量PCR(qPCR)的技术,具有独特的实验意义和应用价值。首先,ChIP-qPCR实验可以验证特定转录因子或其他蛋白质与特定DNA序列的结合情况。这对于确认已知的蛋白质-DNA相互作用以及深入探究其结合机制和功能非常重要。通过这种方法,研究人员可以精确地定位蛋白质在基因组...
ChIP-qPCR是对分离和纯化后的染色质免疫沉淀的DNA进行定量PCR分析，检测特定区域蛋白质结合的丰度。这能揭示转录因子、组蛋白修饰等对基因表达的调节效果。ChIP-Seq技术则是结合第二代测序技术，能高效地在全基因组水平上检测与组蛋白、转录因子等相互作用的DNA片段，提供更全面的基因调控信息。碧云天生产的...