进行流式细胞术检测和FACS分选并分析SpCas9蛋白表达,表明pRosa26-iCas9成纤维细胞中的Cre重组酶分别诱导了两个loxPs和两个lox22272位点之间的有效重组,并导致了强大的SpCas9蛋白质表达(图1H)。在从pRosa26-iCas9仔猪的心脏、肾脏、肝脏、大脑、肺和脾脏分离的原代细胞中,SpCas9也可以被Cre重组酶激活(补充图2B)。
首先,从表达cre依赖的cas9基因的猪中分离出耳成纤维细胞;其次,分离的成纤维细胞被含有creert2,egfp和sgrna的慢病毒感染;再次,用或不用4-oht处理感染的细胞;最后,分析spcas9表达和基因靶向修饰。(b)在含有creert2的慢病毒感染的prosa26-icas9成纤维细胞中,4-oht诱导的spcas9和tdtomato表达的示意图。(c)在不同...
[0060] 图中,A、利用CRISPR/Cas9基因编辑系统同时将GFP基因(绿色荧光蛋白)和 mCherry基因(红色荧光蛋白)分别高效重组到伪狂犬病毒gE基因和TK基因位点,得到 gE基因和TK基因的条件性缺失毒株;[0061] B、挑斑纯化,得到纯化的伪狂犬病毒重组毒株之后,再利用Cre/lox系统同时将 伪狂犬病毒重组毒基因组中的外源GFP基因和...
1. 对Cre元件的改造：在Cre元件的C端接上雌激素受体（ER）的配体结合结构域，为了避免体内雌激素的干...
Cre-Loxp系统条件性敲除AML12细胞目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株.方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠...
本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9基因编辑系统和Cre/lox重组系统编辑伪狂犬病毒基因组快速制备疫苗的方法及其应用;该方法利用CRISPR/Cas9基因编辑系统同时高效地将GFP基因和mCherry基因分别重组到伪狂犬病毒gE基因和TK基因位点,得到gE基因和TK基因的条件性缺失毒株。纯化后,再利用Cre/lox系统将伪狂犬病毒重组毒基因组中的...
目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株.方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CR... 甘暨,杨丽超,张起,... - 《广西医科大学学报》 被引量: 0发表: 2023年 应用CRISPR/Cas9技术制备Sema4D基因条件性敲除小鼠模型 目的:利用...
摘要 心肌祖细胞增殖和分化是心脏损伤后修复再生的基础,而Isl1被认为是心肌祖细胞的特异性标志。为了研究以及示踪Isl1+心肌祖细胞及其分化后代,该文尝试利用成簇规律间隔短回文重复序列CRISPR/Cas9系统,将Cre ER...展开更多 Cardiomyocytes in adult mammals retain a limited ability to proliferate in response to ...
4 μg plasmid DNA (2 μg Cas9/gRNA plasmid and 2 μg floxed donor DNA) or 5 μg Cre mRNA was used for every 106 cells in a cuvette with 1 mm diam- eter (voltage 170 v, duration 3 ms, and pulse 1). The electroporation buffer contained 120 mM ...
第一节、Cre-loxP技术第二节、CRISPR-Cas9技术第三节、病毒工具简介第四节、组合应用示例 基因操作技术一览 4 1.Cre-loxP技术简介 5 Cyclizationrecombinase Cre蛋白于1981年从P1噬菌体中被发现，属于λInt酶超基因家族。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码343个氨基酸,38kDa,单体蛋白。...