Cas13a不仅能够特异性识别并切割靶标RNA,还会在切割过程中释放出强大的非特异性单链RNA反式切割活性。这种活性使得Cas13a能够在切割体系中高效地切割任意单链RNA,从而在RNA水平上实现广泛的调控和检测功能。 2.结构形态 Cas13a蛋白的分子量约为140 kDa,其结构主要包含两个HEPN(Hypothetical Endonuclease with a Pore-...
3. 酶切方式不同。Cas12b酶切7个交错核苷酸；Cas12a酶切的是交错末端，5' overhangs。4. 应用技术不同。Cas12b蛋白应用的技术是HOLMES v2；Cas12a蛋白应用的技术是DETECTR和HOLMES。Cas13a的作用机制：CRISPR-Cas13系统与crRNA、底物结合形成三元复合体后，Cas13蛋白被激活，此时Cas13蛋白不仅能切割底物RNA，...
CRISPR/Cas系统分为两类六型，1类包括Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型，通过多个Cas蛋白发挥功能，占已鉴定CRISPR/Cas位点的90%；2类包括Ⅱ型（Cas9）、Ⅴ型（Cas12）和Ⅵ型（Cas13），通过单一的Cas蛋白发挥功能，占已鉴定CRISPR/Cas位点的10%，是理想的基因编辑和体外检测工具。三、Cas12a与Cas9的区别 1.crRNA 对于Cas9，...
在基于Cas12的检测系统中,目标DNA在等温条件下通过重组酶聚合酶扩增(RPA)或环介导等温扩增(LAMP)进行扩增,当Cas12检测并切割特定的目标DNA序列时,它也会特异性地切割连接荧光分子的ssDNA,产生荧光信号。该检测系统已经应用于HPV和SARS-CoV-2等病原体的特异性检测。 Cas13:靶向切割ssRNA和附属切割任意ssRNA Targets ...
Cas12与Cas9的主要区别在于其剪切靶标的特异性。相对于Cas9只能识别和结合PAM序列附近的DNA,Cas12能够在缺乏PAM序列的情况下识别和结合目标DNA序列。这一特性使得Cas12在某些特定基因组中的靶向编辑更加灵活和高效。 Cas13则是一种专门用于剪切RNA的CRISPR-Cas蛋白质。与Cas9和Cas12不同,Cas13主要针对RNA分子进行编辑...
六、基因编辑工具Cas12a(Cpf1) 1、Cpf1的发现 2、Cpf1与Cas9的区别 3、Cpf1的应用案例 4、Cpf1可同时介导多个基因的编辑 第二天上午8:30-11:30 七、利用CRISPR/Cas9技术创建基因组编辑细胞系 1、目标基因的基因组组成分析 1.1 ...
9. CRISPR-Cas12的工作原理 10. CRISPR系统的致命缺点 11. 如何选择合适的CRISPR系统? 第二至三天 二. CRISPR系统可以做什么? 1. 基因敲除/基因敲入 i. 基因修复途径介绍(NHEJ和HDR) ii. Knock-in和Knock-out的简介 iii. Knock-in策略简介(HDR/Retron/双pegRNA策略/GRAND/TJ-PE) 2. 多敲系统简介 3....
随着CRISPR技术的进一步发展,一些新的Cas蛋白(Cas12/Cas13/Cas14)不断被发现,它们区别于Cas9,即在识别某种序列之后,会同时激活其切割能力,切割体系中的DNA或RNA。利用其快速、特异性强等特点,科学界也在开发新的诊断工具,特别是CRISPR系统在病原体、肿瘤基因诊断领...
第2类CRISPR - CAS系统特别受关注,因为它们的可编程单效应核酸酶在基因组工程和核酸检测工具上大显神威。第2类系统包括基于cas9、cas12和cas13效应蛋白的II、V和VI型。Cas9含有一个HNH核酸酶结构域,一个Ruvc核酸酶结构域,它们一起切割双链DNA。Cas12包含一个单一的Ruvc核酸酶结构域,该结构域切割PAM序列附近的...