VPR、SAM或SunTag)或转录抑制因子(如KRAB)融合后,结合sgRNA能促进或抑制目的基因的表达。 CRISPR-dCas9系统是通过激活或抑制细胞内源基因表达来提高或抑制目标基因的表达量,它不需要转入外源DNA,操作更简易。此系统可在同一个启动子上设计多个sgRNA来提高或抑制基因的转录活性,目的基因的转录本也会覆盖的更全面。
dCas9-VPR系统已经被用于上调基因表达,来研究基因的功能。除了特定的激活蛋白编码基因外,dCas9-VPR系统还可以有效地靶向lncRNA的表达。为了探讨lncRNA DANCR在大鼠脂肪干细胞软骨形成和骨愈合特性中的作用,Nuong Thi Kieu等人(Nguyen et al.,2021)通过dCas9-VPR特异性地上调了内源性lncRNA DANCR的表达。激活DANCR的...
dCas9-VPR系统已经被用于上调基因表达,来研究基因的功能。除了特定的激活蛋白编码基因外,dCas9-VPR系统还可以有效地靶向lncRNA的表达。为了探讨lncRNA DANCR在大鼠脂肪干细胞软骨形成和骨愈合特性中的作用,Nuong Thi Kieu等人(Nguyen et al.,2021)通过dCas9-VPR特异性地上调了内源性lncRNA DANCR的表达。激活DANCR的...
pAct:dCas9-VPR载体序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pAct:dCas9-VPR载体序列CTTTCCTGCGTTATCCCCTGATT...
例如，将dCas9与VP64融合，VP64是由四个单纯疱疹病毒的16个氨基酸大小的转录激活结构域（VP16）串联组成，一些CRISPR基因激活工具进一步将dCas9与由VP64、P65和Rta（VPR）蛋白组成转录激活复合物融合，以实现更强效的基因表达效果。2. 表观修饰编辑工具 基因组中有多种表观遗传调控机制，如DNA甲基化、组蛋白翻译后...
a dCas9融合物VP64、VPR及其他转录激活效应蛋白在基因转录起始位点附近结合,促进基因转录。b dCas9可能与KRAB或其他转录抑制效应蛋白融合,并与基因转录起始位点结合从而沉默基因转录。c dCas9与p300或其他组蛋白乙酰化酶融合形成的复合体与基因转录起始位点或增强子...
CRISPR/Cas9 mediated endogenous gene activation (CRISPRa) using enzymatically inactive Cas9 (dCas9) fused to transcription activation domains (VPR) allows for precise and fine-tuned gene activity control when targeted to promoter or enhancer regions of interest via guide RNAs (gRNAs). Transgenic ...
a dCas9融合物VP64、VPR及其他转录激活效应蛋白在基因转录起始位点附近结合,促进基因转录。b dCas9可能与KRAB或其他转录抑制效应蛋白融合,并与基因转录起始位点结合从而沉默基因转录。c dCas9与p300或其他组蛋白乙酰化酶融合形成的复合体与基因转录起始位点或增强子区域结合,促进组蛋白乙酰化,进而增强基因转录。d. d...
按照转录激活系统的发展和作用效果,将其分为基础型转录激活系统和增强型转录激活系统。增强型转录激活系统包括VPR 系统、Sun Tag 系统和SAM系统。三种系统各有特点,且都能显著增强目的基因的转录激活效率。 (2) dCas9- 表观遗传修饰系统; 表观遗传修饰对基因表达的调控发挥着重要的作用。基于CRISPR-Cas9统的易操作...
此外,与传统使用的 dCas9-VPR 系统相比,桥 RNA 介导的转录激活系统使 NeuroD1 表达增加 6.1 倍,使 ACTC1 表达增加 2.9 倍(图2b)。此外,进一步的研究表明,具有高基础表达的基因在系统中更难激活,这与早期研究一致。 图2:用于 HEK293T...