近年来，研究者采用各种策略对SpCas9进行升级改造，这使其PAM识别序列从传统的NGG拓展至NG、NRN甚至NYN，有效拓展了SpCas9及其衍生工具的应用前景（特别推荐丨基因魔剪CRISPR/Cas9新进展——新型利器xCas9 3.7利刃出鞘；Science | 摆脱PAM困扰—Cas9强势升级获得基因编辑新利器SpRY）【1-5】。目前各类SpCas9的突变体...
2017年,世界卫生组织(WHO)将耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌添加到优先研究目录中,以开发针对该物种的新抗生素或策略。在过去的几十年中,抗生素挽救了无数生命,但广谱抗生素在医学和畜牧业中的过度使用导致了细菌的快速进化以及超级细菌的出现。...
第一,xCas9 3.7具有更灵活的PAM选择性,能识别更大范围的PAM序列,包括NGG、NG、GAA和GAT;第二,它具有更优的靶向转录激活性和更强的切割基因的能力;第三,新构建单碱基编辑器xCas9(3.7)–BE3能够对致病性突变位点进行C•G→T•A和A•T→G•C的碱基替换,其效率分别高达73%和71%,明显优于SpCas9–BE3...
为此研究者尝试通过蛋白质工程拓展YE1为基础的CBE系统的活性窗口。首先，通过替换nCas9为nCas9-NG突变体，YE1-NG可识别的PAM位点从NGG拓宽为NG。研究者还通过替换nCas9为环化排列的Cas9（CP-Cas）变体CP1028得到YE1-BE4-CP1028，其活性窗口与BE4相似。随后为证实优化过的CBE系统在其它方面的安全性，研究者对YE1...
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/，选择Gene，输入基因名称物种：CD28 HUMAN，点击Search（见图1）；第二步，点击第一个基因（见图2）；第三步，下拉至转录本图形区，了解常用Genbank数据命名形式: NM_标准的编码转录本；XM_预测的编码转录本；XR_预测的非编码转录本；NR_标准的非编码转录本；NC_、NG...
NgAgo编辑位点推测 说到这儿再补充点NgAgo有关的信息:韩的NB paper没有提及NgAgo明确的编辑位点,如此则不适合用这个酶切位点鉴定的方法。 但是看看他提供的数据(如上图所示),个人推测有可能切割位点就在箭头所示的两个地方。仅仅是个人推测,没...
及加拿大韦仕敦大学Joe S. Mymryk共同通讯在mBio(IF=7.87)在线发表题为“Prokaryotic Argonaute Protein from Natronobacterium gregoryi Requires RNAs To Activate for DNA Interference In Vivo”的研究论文,该研究使用基于异源大肠杆菌的模型系统研究来自 Natronobacterium gregoryi 的 pAgo(NgAgo) 靶向质粒和噬菌体...
在SWISSv2中同时表达胞嘧啶脱氨酶模块和腺嘌呤脱氨酶模块，实现C-to-T和A-to-G双重功能编辑；在SWISSv2中引入成对的sgRNA，成为SWISSv3，实现C-to-T、A-to-G和Knock out三重功能编辑(图)。并且，使用Cas9的PAM变体Cas9-NG进一步拓展了SWISS系统在基因组上的靶序列选择。在水稻植株中，SWISSv3在水稻植株中...
DsDNA 200ng sgRNA 200ng NLS-Cas9 Nuclease 0.5-1ug 10×Reaction Buffer 2ul RNase Free Water 至20ul 37 ℃保温1 h、70℃保温10 min 注:可在反应体系中添加20U的RNase Inhibitor,防止dsDNA不纯导致sgRNA的降解。 储存/保存方法: -20℃保存,或-80℃长期保存。 产品用途: 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体...
以SpCas9为例:Keith Joung实验室最早于2015年便通过易错PCR策略获得可识别NGA的SpCas9-VRQR突变体及NGCG的SpCas9-VRER突变体【1】。2018年,David Liu实验室利用其独有的定向演化技术PACE构建出可识别NGG、NG、GAA和GAT的xCas9 3.7变体(详见BioArt报道:特别推荐丨基因魔剪CRISPR/Cas9新进展——新型利器xCas9 3.7...