通过搜索Cas13 gRNA,你可以在艾博思克隆crRNA的质粒。你可以选择进行细菌或哺乳动物表达的质粒。 对于哺乳动物的表达,质粒有一个U6启动子,为每个Cas13蛋白特有的DR,一个允许插入crRNA的限制性内切酶位点,和一个转录终止位点。 一旦你的gRNAs/质粒准备好,将它们与Cas13一起通过...
sgRNA和PAM,Cas蛋白是发挥识别、切割的功能蛋白,sgRNA是Cas蛋白的“导航”,而PAM是CRISPR-Cas系统区分...
通过搜索Cas13 gRNA,你可以在艾博思克隆crRNA的质粒。你可以选择进行细菌或哺乳动物表达的质粒。 对于哺乳动物的表达,质粒有一个U6启动子,为每个Cas13蛋白特有的DR,一个允许插入crRNA的限制性内切酶位点,和一个转录终止位点。 一旦你的gRNAs/质粒准备好,将它们与Cas13一起通过递送系统运送到您的细胞系中发挥作用。
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影响GFP-tiling筛选中观察到的gRNA富集的特征之一是crRNA折叠。预测的PM crRNAs二级结构和相应的最小自由能(MFE)与gRNA疗效呈正相关。于它们与观察到的gRNA富集的相关性,研究者们定义了15个crRNA和目标RNA特征。利用这些特性,研究者们试图推导出一个可推广的“目标”模型来预测Cas13d的敲除效果。我们比较了机器学习...
Cas13是由多结构域单一蛋白构成的RNA内切酶,可以将Pre-crRNA加工为成熟的crRNA,并在crRNA的引导下,结合目标RNA并经历蛋白构象变化形成一个RNase活性位点。该RNase活性位点不仅能特异性切割目标RNA,还会非特异性切割其周围的RNA(bystander RNA...
CRISPR-Cas13d是一种小型RNA编辑系统,其中的Cas13d核酸酶能在crRNA的引导下对目标RNA进行切割而实现转录水平的基因表达调控【5-6】。此外,Cas13d还能将crRNA前体加工为成熟的crRNA,因此可通过构建多crRNA表达阵列实现多基因表达调控。 ...
Cas蛋白是利用源自CRISPR序列的RNA(crRNA)作为指导序列以识别并切割 与crRNA互补的多核苷酸特定链(例如,DNA)的酶。 [0007] CRISPR‑Cas系统共同构成原始的原核“免疫系统”,其赋予对外来致病遗传元件 (如存在于染色体外DNA(例如,质粒)和噬菌体中的那些)或由外来DNA编码的外来RNA的抗 性或获得性免疫。 [0008] ...
新RNA 编辑技术CRISPR-Cas13
Cas13a and Cas13d both comprise a crRNA recognition (REC) lobe and a nuclease (NUC) lobe, which exhibit similar conformational changes from the binary surveillance complex to the ternary complex; for example, the binding channel is enlarged to accommodate the crRNA-target RNA duplex and the dis...